94166抗生物质的育种与发酵条件的研究.pdfVIP

94166抗生物质的育种及发酵条件的研究 邵莉莉 (上海市农药研究所) 摘要：通过分离从广西地区采集的土样中分离得到的放线链霉茸94166茵株所产生的次衄代谢物质． 对除革利各筛选靶标植物有很强杀草活性．现以运用自然分离和紫外诱变等菌种选育手段．使变异株 时稗革的抑制率从初始的5m儇高到90％左右，时马唐的抑制率也从550i攉高副90％左右。在进行发 酵条件的研究，发现通过正交实验合理调整c，N比，对稗草和马唐的抑制率进一步提高，可迭980／圾 10／往右． 关捷词：94166 自然分离紫外谤变正交实验 我国目前农田化学除草所使用的大多是化学合成除草剂。由于连年使用，已给土壤带来不同程 度的残留，影响后茬作物生长，尤其是氯磺隆等磺酰类除草剂。如何从微生物代谢产物中寻找有优 良除草效果而又易于被自然界分解、无残留的新型除草剂．这是研究94166的目的。 94166抗生物质，经初步分析鉴别，它属于脂溶性物质，因而不同于水溶性的双丙氨膦。另外 从薄层层析鉴别的情况来看，在硅胶薄扳上所使用的展层溶剂系统，94166和放线酮的展层溶剂中 两者的Rf值相差一倍以上，因此我们认为94166的活性成分不同于放线酮之类已知有除草活性的 物质。通过生物技术手段或生物与化学相结合的手段．筛选高产菌株以用于发酵工业生产，进行农 田实验以验证实际应用性。目前研究结果表明94166菌株所产生的次级代谢物，在未经分离提取时． 对稗草、高粱、黄瓜、萝h、马唐、春蓼等除草剂筛选靶标植物活性达90—1009＆。 1实验材料 1．1菌种农药所从广西地区采集的土样中筛选得到的具有强除草活性的94166菌种。 1．2培养基 0．0黜、NaCl0．O确、 高氏培养基：可溶性淀粉2％、KNO】0．1％、K2HPq0．05％、MgS04·7H20 7．2—7．4。 FeS0。0．001％、琼脂1．2％、PH 7．0 燕麦培养基：燕麦209(置蒸馏水1000ml中煮20分钟，纱布过滤)、琼脂129、PH 微量盐液lcc(FeS04·7H200．19、MnCl2·4H200．Ig、ZnS04·7H∞0．19， 溶于蒸馏水1000m1) 发酵培养基：可溶性淀1％葡萄糖2％、黄豆粉2．5％、牛肉膏0．1％、酵母粉0．4％、 7．O Nacl O．005％、PH 0．2％、K2HP04 2实验方法 2．1实验流程 (1)自然分离 原始菌株墒子斜面一玻璃珠振荡打碎一单孢子悬浮液一诱变处理一平板分离—移入斜面 (2)发酵培养 将发酵培养基分装进摇瓶后灭菌，待斜面孢子成熟后，挑斜面发酵培养。 (3)正丁醇抽提 近3天左右的培养．发酵基本完毕．进行放瓶。 离心：每瓶取10ml，离心后弃去菌丝体，上清液待用。 船 b．正丁醇萃取：取4ml上清液加入4ml正T醇．摇匀后离心。 c．上层正丁醇相取出，定量每管取2ml，生测。 (d)生化活体测定 2．2菌种诱变 (1)制各单孢子悬浮液 用接种环刮下大片休眠孢子放于无菌试管中，震荡后倒入一无菌、装有玻璃小珠的瓶内摇动． 打散孢子。将菌液倒入有丝绵的漏斗中过滤，所得单孢子悬浮液作为待处理菌悬液。 (2)诱变处理 取2ml制备的菌液加到直径5cm的培养皿内，放入～无菌磁力搅拌子，然后置于磁力搅拌器上， 3分钟，分别取得三种处理。由于无红灯，操作用黑纸包住进行。 不同照射时间的适当稀释度菌悬液吸取0．1m1至平皿培养基上，用已灭菌的涂布棒均匀涂布．倒置 于28C培养ll天。菌种成熟后进行菌落计数，以未照射的菌液形成的菌落数为标准，计算不同照 射时间的死亡率。根据菌落外