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大孔阴离子树脂分离纯化微生物转化液中5-氟尿苷的研究 赵薇 郑珩 顾觉奋 中国药科大学生命科学与技术学院，南京210009 5-氟尿苷(1-β-D呋喃核糖基-5-氟尿嘧啶，简称5-FUR)是一种重要的5-氟嘧啶类衍生物， 可以作为许多抗肿瘤抗病毒核苷类药物的合成中间体。目前，5-FUR的来源主要是化学合成。 合成过程中需对碱基和核糖进行保护和去保护，步骤繁琐、副反应增多，且碱基和核糖的缩 合会产生同分异构体，经拆分、纯化步骤至使收率很低。反应过程涉及易燃易爆有机溶剂存 在安全隐患并污染环境[1]。而采用酶法合成5-FUR规避了利用化学法合成5-FUR副反应多、 耗时、收率低等缺点。酶法合成5-FUR是利用能产生嘧啶核苷磷酸化酶 （PyNpase）的产气 肠杆菌突变株作为酶源，该酶能够催化底物分子间碱基互换，从而实现底物尿苷(Uridine， UR)和5-FU转化生成产物尿嘧啶(Uracil，U)和5-FUR。 第16届反应性高分子学术讨论会 工艺流程图： l￡南30l10嘲p 25℃，震荡2如 Imn毛渤g动态洗成一真．空浓缩一 饱和树脂————————+洗搅液p————+ 5转化液l细扣 。P}118 l嘲∞迅翱吐，蕾 p 4℃．静置24扣 懦层硅胶t∥——。◆。 (256嵋1窑硅胶)，——1磊i虿=■——-．ER撕。 p爹蠹半。瓣囊产蒸等一瓣2∞～3∞目建胶39麓柱p…一 ： !茎：竺竺!．}．f1琢精品。 ’真空干燥。2畦纯水溜Ip (1矾上lo。％)p 讨论 1．摸索更适展开剂 硅胶柱色谱的展开剂的摸索时，根据在11C薄板上具有良好分离效果的EtoH：EA系统 的介电常数g=7．39，理论上计算介电常数与该系统的相当的其他展开系统进行预实验，通过 微调该系统以期获得更佳的分离效果，所以实际确定的铲5．57。借鉴此思路，可以继续寻找 理想的展开系统，以获得更加广泛的应用。 2．尝试二次洗脱 本研究尝试各种分离方法，最终从微生物转化液中分离得到了}玎?Lc检测纯度loo％的 5．FI瓜。虽然该方法可以分离去除转化液中其他杂质，但是由于在硅胶柱展开时，流动相中 有醋酸存在，调节pH后旋蒸干燥纯水溶解后，样品中含有一部分醋酸钠，因醋酸钠无紫外 吸收，限制该法。5．咖t与前一种杂质微量U△Rf相差很大，两物质流出不交叉，可考虑在 U完全流出后，换用其他易挥发溶剂以适当比例组成展开剂进行二次洗脱，收集含5．兀瓜 的流份，真空薄膜蒸干溶剂，此思路有望得到5．FL瓜纯品。 3．研究新方法 由于转化液中5．R瓜的浓度很低，限制了每次柱色谱的上样量；即使进行一定程度的 放大，也难以用于工业生产。因此，下步工作可尝试提高第一步洗脱率，找寻可以替代硅胶 的其他树脂以及方法(比如亲和层析…01)。 参考文献 【1】阮期平，周长林，窦洁等，微生物学报[J】，2002，42(1)：117—120． et [2】Solangim，s．Memon，M．I．Bh锄gera1．，．，矿凰黝臌^如研．【J】，2009，17l：815—819． MIet 【3】sol锄舀m，MemonS，Bhangera1．，．，QⅣ舷口以^彻f皑【J】，2010，176：186-192． 【4】姜市春，古静燕，彭正松等，天然产物研究与开发【J】，2007，19：13l一134． 【5】雷引林，刘坐镇，邬行彦，中国抗生素杂志【J】，1999，24(5)：334—336． Ichilnot0a1．Ribosidationof T，UsllioK I，et 【6】Sal【ai 4一Hydrox)，(3，4曲p”azolopy—riIllidineby E九vmiacarotovora 【7】孙毓庆主编，薄层扫描法及其在药物