重症肝炎患者肝组织金属蛋白酶-1与其抑制因子-ImRNA表达的研究.pdfVIP

HCV E2蛋白是HCV基因组编码的一种重要的结构蛋白质。在抗HCV保护性疫苗研究中，一般认 为E2的HVRl区具有重要的中和表位。而HVRl又是变异最大的区，其诱导产生的抗体往往是病毒株／ 型特异性的，因此研制保护性疫苗非常困难。许多学者发现，一种抗HVRl与不同的HVRl变异株有一 定的交叉反应。又有学者以200多个HVRl序列为基础，构建噬菌体展示文库，筛出的模拟表位(删一 motope)能诱导产生与大量HCV变异病毒株有交叉反应的抗体。由此看来，发展多种HCV E2混台抗体 可能对太多数I-ICY变异株产生中和作用。但是，通过杂交瘤技术生产人一人单克鹰抗体十分困难，人 源化噬菌体抗体库能在体外通过相应筛选噬菌体而获得的特异性的人单克隆抗体，解决了杂交瘤技术不 易生产人单克隆抗体的问题。我们以HCVE2重组蛋白包被为固相抗原在第3轮筛选后，使结台HCVE2 的噬菌粒富集了96倍。实验表明从噬菌体抗体库中筛选出的HCVE2人源单克隆抗体，具有较强的结 合活性，且该方法具有简便、快速、经济等特点，避免了利用杂交瘤技术制备该抗体周期长、尤其是存 在鼠源性蛋白反应的问题。ELISA和免疫组织化学技术鉴定，筛选得到的HCVE2单链可变区抗体具有 较高的抗原结合活性和较好的特异性。 蛋白酶的抑制荆在抗人免疫缺陷病毒l(HIV一1)感染的治疗中具有十分重要的作用和地位。因而 人们推测通过寻找HCV病毒蛋白特异性的小分子抗体，可能是探索抗HCV新型治疗方法的重要途径。 在我们的工作中，利用噬菌体抗体库技术已经得到HCV 体。通过逆转录病毒载体和腺病毒载体，可以将这些单链可变区抗体的编码基因导入到细胞中进行抗 HCV的细胞内免疫的基因治疗。关于HCV单链可变区抗体介导的细胞内免疫基因治疗的抗HCV治疗新 方案正在探索之中。 A18．重症肝炎患者肝组织金属蛋白酶一1及其抑制 因子一ImRNA表达的研究 华中理工科技大学，同济医学院附属同济医院 石淑仙张志安 基质金属蛋白酶(matrix matrix． metaUopm- ECM)，对肝组织的胶原沉积和组织结构的改建具有重要作用，基质金属蛋白酶一l(matm 性受金属蛋白酶组织抑制因子一1(Tissueinhibitor 一1可与MMP一1形成复合物而抑制它的胶原降解活性，导致ECM在肝内过度沉积。重症肝炎患者易形 成坏死后肝硬化．我们的研究业已证实重肝患者的肝组织胶原纤维基因和胶原蛋白的表达均显著增加。 现在，我们从胶原分解的角度探讨其纤维化发生的机理。 材料和方法 一、标本来源 慢性重症肝炎15例。临床及病理学诊断根据2000年西安第十次全国病毒性肝炎会议修订的病毒性肝炎 防治方案。另选用6例腹部手术时取得的非肝炎患者肝组织对照，男5例，女1例．平均年龄42岁。 肝组织均常规10％福尔马秫固定，石蜡包埋。 二、检测 (一)原位杂交 GTITC ATGAG 记的寡核苷酸探针，有三个片段。MMP一1寡核苷酸探针序列为：(1)5’一crIGT GGGAA TCGCT ACAGCCCATGACTYATIECC C．CI_GT一3’；(2)5’一CCIGA TYfGA一3’；(3) GAACCAGCTA 5’一TCCIGCAGTr CAGGATGCCAGAAC,C AIVA?z 一ACAGGAACAA