香菇多糖的分步酶法提取研究.pdfVIP

中国菌物学会第四届会员代表大会暨全阑第七届菌物学学术讨论会 香菇多糖的分步酶法提取研究幸 程俊文1’2 吴大丰2吴学谦1’2h贺亮1陈如楚2李海波1魏海龙1， 付立忠1孙敏华L2吴庆其1’2 浙江丽水323000) (1浙江省林业科学研究院杭州310023；2浙江益圣茵物发展有限公司 摘要：首先用纤维素酶，果胶酶，木瓜蛋白酶分别对香菇样本进行酶解提取香菇多糖，经正交试验获得各种酶 的最佳工艺参数；然后依次分步用纤维素酶，果胶酶和木瓜蛋白酶组合酶解处理香菇子实体提取香菇多糖，并与 传统的热水浸提法作对比试验；结果表明．分步酶法提取的香菇粗多糖得率可达14．17％，比传统的热水浸提法 粗多糖提取得率提高了128．2％；经紫外光谱和红外图谱分析显示，该多糖经提纯后纯度明显比热水浸提法提取 的多糖高，质量更好。 关键词：香菇多糖，分步酶，提取，光谱 香菇(Lentinusedodes)为世界上第二大食用菡，现代医学研究认为，香菇中的香菇多糖 (Lentinan)具有多种生物活性。香菇多糖是典型的T细胞激活剂，能促进人体内细胞毒T淋巴细 胞(CTL)的产生，提高CTL的杀伤活力，增强人体免疫功能(王志民和陈祥贵1998)。此外， 香菇多糖对多种基凶、同种基因和原发性肿瘤具有显著的抑制作用，对化学致癌、病毒致癌也有 抑制作用，已成为十大抗肿瘤药物之一。此外，香菇多糖还具有抗病毒、降血脂等生物活性。 对香菇多糖的分离提取，传统的方法是对子实体热水浸提后再用乙醇沉淀(白玉静和佟丽华 2006)。由于香菇中含有大量的纤维素、果胶、蛋白质等非多糖类大分子物质，形成了致密的子 实体结构，大大阻碍了多糖在浸提过程中的释放。进而人们使用含纤维素酶、果胶酶，蛋白酶等 酶类的复合酶制剂对香菇子实体进行处理，以降解非多糖类物质。使细胞内外的多糖更有效地被 T． 提取出来(颜邦干等2006；李卫旗等2002：余冬生和纪卫章2001；张惟杰1994 Lonseny 等2006)。由于不同的酶类达到最高酶活力所需的加酶屋、环境条件和酶解时间各不相同，一次 性地使用复合酶制剂对多糖提取效果的改善仍不理想。因此，本文将香菇子实体依次采用纤维素 酶，果胶酶、蛋白酶分步处理，使每种酶的活力得到充分发挥，最大程度地提高香菇多糖提取的 得率和质量。 l材料与方法 1．1材料 香菇子实体(去柄)，由浙江益圣菌物发展有限公司提供：纤维素酶，上海伯奥牛物试剂厂； 木瓜蛋白酶，四jll攀枝花市酶制剂厂：果胶酶，Fluka公司产品；其它试剂均为国产分析纯试剂。 1．2香菇多糖的热水浸提 取1009香菇子实体干燥粉碎后，加2000ml水80℃下浸提8h，真空抽滤后滤液浓缩至 原体积的1／10，向浓缩液中加入4倍体积95％乙醇，搅拌后静止12h， 3000rpm离，I二,10min， 去除上清液，沉淀用乙醇和甲醚交替洗两次自然风干得粗多糖，称重。 13香菇多糖的酶法提取 取1009香菇子实体干燥粉碎后，加1000ml水常温浸泡2h，调整pH值和温度至设定值，加 入设定量的酶制剂，按设定时间进行酶解，真空抽滤后滤液浓缩至原体积的1／s，向浓缩液中 加入4倍体积95％乙醇，搅拌后静止12h，3000rpm离心10rain，去除上清液。沉淀用乙醇和 ‘浙江省科技计划重大项目(2006C12094，2006E20020) ”通讯作者：wxq655@i63．corn 中国荫物学会第网届会员代表大会暨全困第七届葡物学学术讨论会 甲醚交替洗两次自然风干得粗多糖，称重。 1．4香菇多糖的分步酶法提取 首先用纤维素酶、果胶酶，木瓜蛋白酶分别对各自的香菇样本酶解处理，进行多糖提取，计 算多糖的提取率，获得各种酶的最佳工艺参数。然后再用各种酶的最佳工艺将三种酶对同一香菇 样本分步依次处理，最终计算多糖的提取率，并与热水浸提法的结果作对照。本实验对三种酶的 四个工艺条件因素设定如下：因素A(相对香菇的加酶量，％)，因素B(酶解温度，℃)，因素 C(酶解pH值)，因素D(酶解时间，h)。参照