日本血吸虫童虫细胞诱导小鼠抗攻击感染免疫学研究.pdf

摘要 第一篇日本血吸虫童虫虫源性细胞免疫小鼠诱生的保护性效果 【目的】在前期研究中发现，用日本血吸虫 sj 童虫的虫源性活 细胞可诱导小鼠产生较明显的抗攻击感染保护性免疫。本研究目的是为 了进一步确认其免疫效果；比较童虫细胞和成虫细胞，死细胞与活细胞 诱导宿主所产生的保护性效果差异及其免疫应答特点；探索最佳的免疫 次数。【方法】S．j尾蚴感染小鼠获得虫体。胰酶消化法制备虫源性细胞。 台盼蓝染色检测细胞活率。活细胞经．20℃冻融后定为死细胞。PCR扩增 鉴定血吸虫虫源性细胞的种属特异性并检测细胞的纯度。本研究设计了 两个实验方案。在实验一中，53只昆明小鼠被分成4组，即对照组10 免疫原对小鼠作皮下注射，共4次。于末次免疫后l周用30±l Sj尾蚴 对小鼠进行攻击感染。感染后第42天剖杀冲虫，观察结果。根据实验l 结果，LLC是诱导小鼠产生最佳保护性效果的免疫原，因此，在实验二 中选择了LLC对昆明小鼠作不同次数免疫，比较所诱导产生的保护性免 疫，探索最佳免疫次数。28只小鼠随机分为4组：免疫1次组 V1 、2 ±lS．i尾蚴进行攻击感染。感染后第45天解剖小鼠冲虫。保护性效果的 观察指标包括：计数虫荷及卵荷；测量虫体长度和肝组织内虫卵肉芽肿 面积；对虫卵肉芽肿进行组织病理学观察。免疫学观察指标包括：ELISA 分差异及免疫特性差异进行比较分析。【结果】Sj童虫源性细胞形态和 大小不一，活率在80％以上。经PCR鉴定，细胞具有日本血吸虫种属特 异性且无鼠源性宿主成分。免疫组与对照组的保护性指标比较显示：在 此外，在实验2中，攻击后45天从V2和V3组小鼠体内所获得的虫体 长度明显短于Co组的虫体；LLC免疫鼠肝表面虫卵结节明显少于DLC 和DAC免疫鼠及对照鼠的；V3小鼠肝虫卵肉芽肿显著小于其他3组的。 免疫学观察指标显示：LLC，DLC和DAC均能诱导小鼠产生抗童虫或成虫 的结果显示，18天童虫细胞蛋白区带与全虫蛋白有明显差别，18天童虫 细胞制备物具有较强的抗原性，但与感染血清未见明显识别条带，童虫 细胞中分子量约为38kDa组分仅被细胞抗原免疫血清所识别。【结论】本 研究表明：来源于18天童虫的活细胞可诱导昆明鼠产生较理想的免疫保 护效果；免疫2次或3次的保护性效果无显著差异；IgG亚类绝对水平 正相关；用于免疫接种的细胞源于虫体实质成分，其中38kDa组分可能 是一种优势抗原分子，但对其性质与功能有待于进一步研究。 关键词日本血吸虫，童虫，虫源性细胞，保护性免疫，IgG2a 第二篇日本血吸虫童虫培养细胞免疫小鼠诱导的保护性效果 【目的】前文研究证明，日本血吸虫 ．5力童虫源性细胞免疫小鼠可 获得较为满意的抗攻击感染效果。基于本课题组在sj细胞体外传代培养 技术突破，本研究拟用sj体外培养细胞为免疫原，观察其诱导昆明小鼠 所产生的免疫保护性效果以及免疫应答类型，以探索研发此类疫苗的可 能性。【方法】获取sj尾蚴感染小鼠后不同发育期虫体，在无菌条件下 养。用台盼蓝染色鉴定细胞活率。PcR扩增鉴定传代培养细胞的种属特 异性并检测细胞的纯度。通过两组实验观察传代培养细胞所诱导的保护 性效果及免疫反应类型。在实验一中，3组小鼠每组8只，按1次／两周 ±2尾／鼠的sj尾蚴攻击感染。感染后第42天剖杀冲虫，观察保护性效 果。在实验二中，根据实验l结果 发现Jc一12的保护效果优于Jc一18 ， Ac一30 所诱导的免疫保护性差异。在本实验中，设计了两个接种途径： 4 个免疫组，每组10只，按1次／两周的接种间隔共免疫3次。10只对照 30±l尾／鼠Sj尾蚴进行攻击感染，感染后第40天剖杀冲虫，观察了所 细胞：4．5×106／鼠 ，每组6只鼠。被动免疫后第35天剖杀冲虫，观察 了所诱导的保护性效果及免疫反应类型。用免疫鼠脾细胞与sj尾蚴于体 外共同培养，观察24h，48h和72h的虫体死亡率。检测经相应抗原刺激 后的免疫鼠和非免疫鼠脾细胞分泌的LI一4和IFN—Y水平。【结果】经 椭圆形，可见成对细胞分裂相。与对照组比较，在实验一中，Jc一12组和 的减卵率。两类细胞均诱导宿主产生高水平抗18天童虫抗原的IgG抗体。 面卵结节及肝卵成熟率明显降低。来自于Jcsc小鼠体内的虫体长度明显 短于来自于Ac免疫鼠和对照组鼠。ELIsA结果显示：JC免疫诱导产生相 胞和血清中测出高水平的IFN—Y。^C一30免疫鼠尽管诱导产生了高水平 的特异性抗体及IL一4，但并没有诱导产生明显的保护性效果。被动转移 实验中，仅发现Jc免疫鼠血清获得部分保护性效果。体外杀伤实验结果 显示，Jc和Ac免疫鼠脾细胞均具有部分杀尾蚴作用，但以JC组杀伤率 有较大差异。【结论】用体外培养的童虫细胞免疫昆明