双液相酶膜反应器合成生物活性二肽地研究.pdfVIP

双液相酶膜反应器合成生物活性二肽的研究 姜忠义‘许松伟高蓉 2) (天津大学化工学院，天津，30007 关犍词：多相酶膜反应嚣合成生物活性二肽 分类号：0629．7 Q814．9 生物活性肽在生命过程中起着非常重要的作用，其高效合成方法己成为学术界和科技界的 研究开发热点。迄今为止，生物活性肽的台成主要通过以下三条途径：1基因工程技术；2化 学合成法： 3酶法。其中，酶法在寡聚肽【短肽)的合成中较为常用【n。 本研究以N-乙酰-L-苯丙氨酸的酯类衍生物为羧基末端底物，以L．亮氨酰胺、L．甘氨酰胺、 L·丙氦酰胺、L-缬氮酰胺等L-氮基酰胺为氨基末端底物，以固定化脂肪酶为催化剂．以水．有机 相双相体系为反应介质，在中空纤维膜反应器中合成了N．乙酰一L．苯丙氨酰基．L．亮氨酰胺、N．乙 酰-L．苯丙氮酰基．L一甘氨酰胺、N-乙酰-L．苯丙氮酰基．L．丙氦酰胺、N．乙酰．L．苯丙氨酰基．L．缬氮 酰胺等二肽。所用的多相酶膜反应器具有下述特点!：： (1)膜作为酶固定化的优良载体使酶在类似自然的环境下高效地发挥作用。 (2)以双相介质代替单相介质，解决了底物和产物的溶解度问题。 (3)反应与分离同步进行，过程始终维持在适宜的动力学或热力学条件下进行。 (4)过程集成化使设备费节约，操作费用降低。 以多相酶膜反应器来合成生物活性肽迄今未见文献报道3-4-。。本研究结果表明：多相酶膜 反应器具有很高的二肽合成效率。 司产品，编号L-3126。磷酸盐、无水乙醇、苯、四氢呋哺、戊二醛、异丙醇等均为市售分析纯 产品。N一乙酰一L一苯丙氨酸乙酯(APEE)：自行合成，纯度99％，聚丙烯腈中空纤维膜：平 均截留分子量50000，购白天津工业大学。 或四氢呋喃中．然后加入5克脂肪酶。悬浮液在37℃和300r／min搅拌下反应，直至气相色谱检 测没有乙醇为止。所得沉淀物经过滤，用正辛醇、苯或四氢呋喃洗涤，再用温热乙醇萃取。旋转 蒸发除去乙醇后，用5％碳酸氢钠和蒸馏水洗涤。在甲醇中结晶，通过薄层色谱或商效液相色谱 进一步纯化。 脂肪酶的固定化：将异丙酵通入膜组件中的管程和壳程，使中空纤维膜充分浸泡后排干，在 空气中静置2～3小时．把溶于磷酸缓冲液的脂肪酶通入壳程，循环超滤，再用50wt％的戊二醛 溶液作交联荆使脂肪酶固定于膜上，最后，用新鲜的pH=7．0的磷酸盐缓冲液冲洗膜装置，蚪去 ℃)清洗，最后用蒸馏水再反洗．酶膜可以方便地再生，使用4～5个循环。 多相酶膜反应器中二肽的合成步骤如下【8I：APEE的正辛醇溶液从中空纤维膜的管程通入并 循环， L一氨基酰胺的磷酸盐缓冲液(pH=7．8)从中空纤维膜的壳程通入并循环。两股进料液 国家自然科学基金资助课题(B29604) 扩散进入膜7L后．由固定在膜中的脂肪酶催化而生成二肽。多相酶膜反应器的温度维持在37C。 为防止发生相间泄漏．膜器的管程和壳程保持0．05Mpa左右的压差。定期对两股料液进行取样分 析。 实验结果与讨论 中，正辛醇是较合适的溶剂。 Fig．1多相酶膜反应器操作系统示意图 A：中空纤维膜组件，B：进料泵，c：调节阀，D：抖液贮罐．E：恒温水浴 F：压力表，G：自动电位滴定仪． Tab．1 free Synthesisofdipeptideby lipase 多相酶膜反应器的结构参数IS]和多相酶膜反应器ep-肽的合成结果分别见表2和表3。实验 结果表明．多相酶膜反应器中二肽台成的酶促反应基本上遵循米氏机理删。 !!!：!兰皇竺竺!!堕!!!!!!!巴些!￡些!!!翌罂兰竺!翌些堡兰坚 Reactorinner 20 diameter『(mm) Tab．3 inthe membrane