外加剂对提高固定化E.coli细胞转化能力的作用的研究.pdfVIP

外加剂对提高固定化E．coli细胞转化能力的作用研究 张玮周华徐虹韦萍 0009) (南京化工大学制药与生命科学学院，南京，21 摘要：在卡拉腔包埋固定化Ecoil细胞过程中，通过不同浓度的多种交联荆和吸附利的处理．固定化细 胞转化能力有所提高． 关键词：固定化细胞，L．苯丙氧酸，交联剂，吸附荆 从本世纪六十年代咀来，细胞的固定化技术发展十分迅速，它克服了游离酶在应用中对环境 敏感．性质不稳定．易在酶促反应中失活及产物难以分离提纯的缺点【】。l。但与游离细胞作酶源 相比，亦存在固定化细胞易失活，转化能力相对较低等缺点。本文针对苯丙酮酸转氨反应制各L一 苯丙氨酸研究体系，以卡拉胶为包埋载体““】，针对固定化细胞在酶促反应过程中的转化能力较 低的现状，通过在固定化过程中添加交联剂和吸附剂等外加剂的方法，探讨增加固定化过程中的 催化活性保留、提高周定化细胞转换能力的有效手段。 1 实验材料和方法 1．1 菌种来源：E．coliNo．1，本实验室筛选 1．2试剂：25％戊二醛．生化试剂，上海化学试剂公司；多乙烯多胺，己二胺，CP．永华 特种化学试剂厂； 1．2实验方法 1．2．1细胞预处理 1．2．1．1常规包埋：取一定量菌泥，加等量生理盐水制成菌悬液，37℃水浴保温备用。 1．2．1．2交联剂处理细胞：取一定量菌泥．加等量生理盐水制成生理盐水后加一定量的交联剂反 应lh，然后加10ml1％N也C1溶液终止反应，离心收集菌体，制成菌悬 液保温备用。 l_2．1．3吸附剂的添加：在菌悬液中加入一定浓度的吸附剂，混匀后备用。 l_2．2细胞卡拉胶包埋方法：见文献【5】 1．2．3固定化细胞的后处理 将成形固定化细胞置于一定浓度交联剂或交联剂混合溶液中浸泡一段时间，然后用生理 盐水洗净备用。 2实验结果和讨论 2．1交联剂预处理细胞对固定化的影响 在细胞包埋固定化过程中，细胞和载体之间结合作用力较小，因所得固定化细胞的强度及酶 活稳定性一般较差．若在固定化前对细胞进行交联处理，有可能提高固定化细胞的稳定性与转化 能力．实验结果见下表 表1交联剂预处理细胞对固定化的影响 Table1．Effectof withcellsbeforeim∞obilization dealing crosslinkingagent 281 由比较可知．以0．025％的戊二醛处理细胞效果较好，固定化细胞转化能力有所提高，但多乙 烯多胺和己二胺对固定化细胞转化能力的提高作用不大，这可能与其本身的结构特性有关。 2．2利用交联剂对固定化细胞进行后处理的初步研究 为改善固定化细胞网格结构，以期增加固定化细胞机械强度并提高活力稳定性，现选用不 同的交联剂对固定化细胞进行后处理。实验结果见下表 表2交联剂处理后对固定化细胞的影响 of rithiImobilizedcell Table2．Effect agentdealing crosslinking 序号 处理类型 单竺翌璺转些登力 l 常规包埋固定化细胞 3．19 2 2．88 0．5％多乙烯多胺液浸泡10min，再加0．25％己二胺液泡8min ． 常规