相关性毛细管电泳用于形态分析与分子生物活性的研究.pdfVIP

相关性毛细管电泳用于形态分析和分子生物活性的研究 夏之宁何梅郭宝元项顺锋 (重庆大学环境与化学化工学院重庆400044) 关键词毛细管电泳相关性形态分析生物活性亲和性 ．．、亭文仅以我们在形态RCE分析和分子生物活性RCE领域开展的工作，以及相关的其它 报道作一回顾。 1相关性毛细管电泳 我们在工作中发现，任何一类毛细管电泳方法，多少都要借助于毛细管电泳这种新型 分离技术去探索物质间的相互作用或物质对共存环境的依存性。基于这个理由，我们才尝 试性地将其叫做“相关性毛细管电泳”(RelationshipCapillary 便于研讨。若误，恳请斧正。毛细管电泳具有速度快、分离效率高、样品用量少等特点。 毛细管电泳的另一特点在于组分分离是基于组分表现淌度的差异，正是由于这一特点，它 保证了组分粒子的特性不受来源于仪器等其它外界力的影响，避免了在色谱分析中组分与 固定相之间的作用影响。因此，在研究毛细管内电解质缓冲液中组分与组分之间的作用时． 就没有其它因素影响研究物质对之间的作用。这使之在分析物与其它组分或共有环境相关 性的分析上可咀发挥独特的作用。RCE研究的对象和体系可以是很广泛的．可以是一种组 分与一种配体或几种配体共存下的相互作用等。其中，研究一对一专一相关性的体系的典 型例子就是亲和毛细管电泳(Affinny Capillary 是RCE的一个特殊方法，ACE属于RCE的一部分。RCE分析具有如下的优点：对考察对 象的纯度要求不高；可以同时研究多种配体对一种对象的结合行为；可以模拟生物体内的 溶液中进行，保持生物对作用所需要的生理条件：不需要对物种进行标记．简化了操作步 骤；已有多种方法供选择。目前，该技术已用于研究各种类型的配体-受体相互作用．并测 定其亲和常数。 2 RCE分析方法及实验模型 (RMECC)：我们认为也可以发展为RCE等电聚焦：相关性毛细管电动色谱：亲和探针毛 细管电泳等方法。开展得较多的区带ACE模型有：峰漂移法、配体分离法，前沿分析法、 Hummel．Dreyer法、空缺分析法等；采用电渗流内标法解决由于电渗流改变引起的淌度误差。 采用毛细管柱前后两检测点的办法，也可以校正电泳淌度和电渗淌度。针对RCE在形态分 析应用上的可行性及分子生物活性分析研究领域的特点，同时为了拓展RCE应用领域，我 们还对RCE分析可变形态中最常用的淌度移动法(或称峰漂移法)从一对一相互作用体系(21， 向无参照体系【3】、一对二相互竞争体系和高阶配合体系【41进行了探索，并且讨论了区带ACE 应用的各种假设、限制条件和实验模型的各种问题。 3RCE的特殊应用对取样和检测的要求 采用毛细管进行电泳为直接进样带来了方便。由于毛细管的管径可以加工成很小的一 个探针式的吸管，这为微区微量取样提供了极为有利的条件。这也给相关性分析在微环境 中应用提供了可能。为了提高微区微量毛细管取样的准确性，已有人设计了一种电渗流驱 动无组分歧视取样技术u】。通过电压和时间的控制，十分准确和高重现性地取样。这种技术 对各种荷电性质组分的进样量均相等．而且零进样的电压值非常小。为电极扩散层内物质 的形态分析或细胞内分子相互作用亲和性分子生物活性研究奠定了基础嘲。RCE检测方面， 除使用商品化的紫外检测方式外[4J，自行研制了多脉冲溶出安培检测m，信号采样频率达到 500 Hz，这种检测技术扩大了对形态粒子种类的检测范围。另外，还发展到采用间接紫外检 测．通过实验模型以排除基础吸光物质对相关性的影响，正在探索激光诱导荧光检测在生 物形态粒子上的体现。 4形态分析与形态毒性分析的RCE研究 RCE可以进行难度较大的可变形态分析研究。原有的毛细管电泳形态分析方法大多直 分析化学的成就与挑觇 接测定形态浓度。RCE形态分析的基本点在于先通过屯泳表现求得可变形态离解成配体与 受体的平衡常数足，再通过计算获得各种配体浓度下的形态浓度(分布)。我们设计的对生 物介质中重金属元素进行研究的RCE方法，是按中毒过程调查生命大分子与重金属形态之 间的相互作用，根据测定出的重金属形态与生命分子(如：氨基酸、蛋白质、核酸等多种 生物分子)、细胞膜组成分子、细胞膜碎片、单个细胞的结合程度，结合细胞毒性实验验证． 建立毒性与RCE结果及形态与生命物质结合能力的相关性，可望将调查毒性的一般形态分 析法向毒性