三相鼓泡塔反应器固定化培养黄孢原毛平革菌合成木素过氧化物酶系地研究.pdfVIP

三相鼓泡塔反应器固定化培养黄孢原毛平革菌 合成木素过氧化物酶系的研究青 张朝晖1夏黎明2抹建平：岑沛霖： 31001 (1浙江工业大学生物工程系 杭州 4) (2浙江大学化工与生物工程系杭州310027) 摘要利用三相鼓泡塔反应嚣固定化培养黄抱原毛平革茸，可“高效地合成木素过氧化物醇系．固定化 栽体为聚氨酯泡沫．实验表明，合成未素过氧化物醇的最佳通气量是1．0vvm，合成锰过氧化物酶的最 佳通气量在O．5—1．0win之间．在通气量1．0vvm下，最大木素过氧化物酶酶活选367U／L，最大锰过氧 化物酶酶活选4．72U／m1．当碳氟比为3,6时，在三相鼓泡塔中可以进行重复间歇培养生产木素过氧化 物酶，连续重复5批，每批最大木素过氧化物酶活力均在250U／L以上，总培养时间迭22天． 关奠词三相鼓泡塔反应嚣黄孢原毛平革茸木素过氧化物酶锰过氧化物醇固定化 黄孢原毛平革菌是一种白腐真菌，它能降解木材中的木质素而使木材呈白色腐朽。1983年Tien 小组】和Glenn小组同时发现木质素被降解的关键是黄孢原毛平革菌产生的胞外过氧化物酶系的作 用，该酶系由两类同功酶组成，分别是木素过氧化物酶(Lignin 物酶(Mn-dependent 降解机理，对底物没有特异性要求，因此除了木质素，黄孢原毛平革菌还能降解多环芳烃、氯代芳 烃、染料、炸药和农药等有机物fL∞】，在环保方面具有极大的应用前景。 选择一个合适的生物反应器生产木素过氧化物酶系是很重要的。有人已研究过转盘反应器14jl、 固定床【6I和发酵罐[71。前两个反应器所得酶活较低，后者搅拌带来的剪切力较大，会对木素过氧化物 酶系产生不利影响。本工作前期的摇瓶实验表明，用聚氨酯泡沫固定化菌丝培养比游离培养能更有 效地合成木素过氧化物酶。本文将采用三相鼓泡塔作为固定化培养产酶的生物反应器，首先对三相 鼓泡塔间歇培养黄孢原毛平革菌合成过氧化物酶系的一般规律进行研究。在此基础上，对反应器中 固定化菌丝重复使用生产木素过氧化物酶的能力进行考察。 l材料和方法 1．1菌种：黄孢原毛平革菌(Phaneroehaete 芽汁固体培养基斜面p】上。 1．2培养基和培养方法 1．2．1培养基：限碳培养基，酒石酸缓冲液【，】。 1．2．2三相鼓泡塔培养： 然后将转速升至140rpm，培养2天，这时菌丝已固定在泡沫块上。(b)无菌操作将三角瓶中的培养 反应器夹套通35℃的水浴进行保温。空气由下而上鼓入塔中进行培养，在反应器中空气贴着一侧的 器壁上流，培养液和聚氨酯泡沫块在气流的带动下，作从下往上，再从另一侧顺流而下的循环流动， ‘本工作由田家自然科学基助 形成一个内循环气升式三相鼓泡塔反应器。 (2)重复间歇培养：当前一批培养的木素过氧化物酶达到最高点附近时．把旧培养基放掉，加 1_3分析方法 1．3．1术素过氧化物酶删。 一个单位。 1．3-3酸性蛋白酶【。ol：底物为血红蛋白。 1．3．4葡萄糖：DNS法 1．3．5无机氮源(NH。’)：微量凯氏定氮法 2结果与讨论 2．1三相鼓泡塔反应器间歇培养台成木素过氧化物酶系 2．】．】产酶进程 蛳 ●∞ 枷 a∞ 枷 宝枷 苫瑚 】 1∞