微生物学的研究中的软电离质谱技术.pdfVIP

m7 微生物学研究中的软电离质谱技术 ～～一一一… L一～‘一 宋亚军杨瑞馥 军事医学科学皖微生物流行翥研究所北京100071 化学分析技术领域的革瓤和进展一真是生物医学研究领域取得突破的原动力之一，垒新的化 学分析方法为生物医学研究工作者提供了强有力的工具，使得他们能够对研究对象进行更为深入 的观察。在这方面最有说服力的例子是色潜技术，目前，包括气相色谱(GC)，高效液相色谱 (HPL(：)在内的色谱分析手段在生物学研究中得到了极为广泛的应用。具体到微生物学研究丽 言，气相色谱分析菌体脂肪酸成分已成为一种公认的细菌分类指标，高效液相色谱对菌体成分的 分析也为微生物生理生化以及分类学研究提供了大量的信息。 质谱(MassSpectrometer，MS)分析是分析化学中已经广为使用的技术方法。其基本原理 是分析样品在特定的条件下转变为高速运动的离子，这些离子根据质量／电荷比的不同在静电场 和磁场的作用下得到分离，用特定的检测器可以记录各种离子的相对强度并形成质谱图otJ。通 过质谱分析，我们可以获得分析样品分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的 信息。早期的质谱由于电离方式对样品的破坏性大，样品纯度要求高，测定质量范围小等原因， 仅限于化学研究领域，对于分子量大，组成复杂的生物样品无能为力。最近出现的软电离技术为 质谱分析进人生物医学研究领域开辟了道路。 软电离技术——基质辅助激光解吸(MALDI)和电喷雾(ESI) assistedlaser 基质辅助激光解吸(matrix desorption 现的质谱电离方式。其工作原理是分析样品与特定的液态化合物(基质)按一定的比例混合，两 者在金属表面形成共结晶，经脉冲激光作用后，分析样品离子化，由检测器加以检测。：基质的作 用是使样品对激光的吸收能力增强，同时吸收大部分的激光能量使其对样品的破坏降到最小。理 想的基质应该具有较好的水溶性，较小的挥发性和一定的化学惰性，常用的基质有烟酸、2，5一 000到1： 二羟基安息香酸、a．氰基。4．羟基肉桂酸等。一般而言，样品与基质的摩尔比在l：1 100013之间能得到最好的检测信号旧J。MALDI电离产生的基本上是分子离子峰，因而能够提供 SOUrCe 样品的精确分子量信息，结合源后衰变(post MS)，也可以获得样品分子的结构信息。由于MALDI电离是脉冲式的，其对应的检测装罩也是 of 脉冲式的飞行时间(time flight，ToO质谱检测器，理论上讲，只要飞行管的长度足够，1、0f 检测器可检测分子的质量数是没有上限的，因此MALDI．TOF质谱很适合研究蛋白质、多肽、 核酸和多糖等生物大分子。目前MALDl一TOF质谱质量检测数检测上限为350KD。此外，由于 MALDI电离技术中样品：鬯和基质混合上样，因而MALDI技术对样品的纯度要求并不高，可以 直接分析细菌培养液、细菌菌体、动物组织等非常复杂的生物样品oJ。 ionization，ESI)技术也是近期诞生的软电离技术，样品溶液通过 电喷雾质谱(electrospray 带有高压(一般为4000伏)的金属注射器形成带电荷的雾滴进入离子化室，离子化室内于热的 气体使液滴蒸发，液滴表面的电荷强度逐渐增大，最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子 进入检测器，与ESI相连的多为四极杆质谱检测器。四极杆质谱的质量检测上限并不高，但具 一10一 有较高的质量分辨率。由于ES!电离技术能使样品形成多价离子，而四极杆质谱检测器检测的 是质量／Eg荷比，因此质量检测上限仅为2000的检测器可以检测分子量高达20KD的分子L4J。