野生稻全DNA快速导入栽培稻获得新株系探究.pdfVIP

野生稻全DNA快速导人栽培稻获得新株系研究。 林红 范芝兰 尹艳李晓方 罗文永潘大建 (广东省农业科学院水稻研究所广州510640) 摘要用电激法和花粉管导入法快速将小粒野生稻、斑点野生稻、药用野生稻及普通野 生稻DNA导^特青及最新推广品种粤香占。其后代性状发生了普遍变异，远缘野生稻较近缘野 生稻易于引起变异，株型因子和产量因子较抗性因子易于受到影响。结果显示，特青经斑点野 生稽DNA电激处理后，差异显著的性状有穗长、株高、粒宽、粒长、百粒重、空粒数、叶宽； 差异不显著的有有效穗数和叶长。在总共16个单株的16个小区中，发生显著变异的小区额率分 别是株高、叶宽100％，穗长37．5％；百粒重25．0％；空粒数12．5％；粒宽、粒长、实粒数 6．25％。而有效穗数和叶长在16个小区中都没有发生显著变异。特青经普通野生稻DNA电激处 理后．除粒宽存在显著差异外，其余性状差异都不显著。粤香占经小粒野生稻DNA电激处理后． 总共9个单株的9个小区中，发生显著变异的小区频率分别是袜高100％，粒宽66．7％，有教穗 效、叶长50．0％，粒长、空粒数111％．而穗长、百粒重、叶宽、实粒数在9个小区中均没有发 生显著变异。稻盛病初步鉴定结果显示：野生稻DNA对粤香占及特青的电激处理均没有使受体 的稻瘟病抗性得到提高；而稻痿蚊鉴定方面，从标葱率来看，野生稻处理组的受害率比特青对 照还要大，结果出乎意料，其原因不清楚，但因R2代仍是不稳定群体，所以，在标葱率不到 100％的群体中，仍有可能隐藏着抗性单株．将这些群体单株保留下来，逐代鉴定仍有可能筛选 到抗性单株，此工作正在进行中。酯酶、过氧化物酶结果显示变异粤香占比双亲多了一条深色 带，而变异长仑占则具有来自双亲的互补条带。实验表明，用简易方法导人外源DNA对于扩大 育种遗传背景被证明是成功的。 关t词野生稻栽培稻DNA同功酶性状 野生稻是栽培稻最近缘的野生物种，是栽培稻遗传改良潜在的基因源，它具有很多独特 的特性，如抗逆性、抗病虫性以及特殊的株型和生长特性。如何将这些性状引入栽培稻进行 利用，丰富现有育种的遗传背景，使水稻育种有一个新的突破是当务之急。适用于水稻的基 因转化方法有很多，基因枪法直接转化外植体体细胞组织，回避了原生质体的制备和培养过 程，是目前普遍采用的方法之一；电击法是借助高强度电脉冲作用击穿原生质体质膜，形成 瞬间小孔，DNA通过小孔进入原生质体内，达到转化的目的。我们首次尝试将电击法直接 用于植物愈伤组织，对再生植株后代的田间性状进行了观察统计及酯酶及过氧化物酶同功酶 谱验证，并对此种方式的转化效果作出田间及实验评价。 1材料和方法 1．1材料 供体选用小粒野生稻、普通野生稻、斑点野生稻及药用野生稻，均取自本所野生稻圃。 -本研究由国家及广东省自然科学基金资助。 233 受体选用本所最新育成的迅速推广的高收获指数籼稻品种粤香占及高产品种特青。 1．2供体野生稻DNA的提取 取5～109鲜叶，液氮研磨，仿、异戊醇抽提，2 滤，加一倍体积冷异丙醇摇动，置于冰箱，捞DNA放人70％乙醇中，TE656C充分溶解， 分光光度计下测定DNA浓度。 1．3组织培养方法 取雌雄蕊分化期到小孢子母细胞期的幼穗，升汞消毒15rain，无菌条件下接于附加2n∥ 500～2 L2．牟D，CI-ISlXhng／L的N6培养基上，pH5．8，26±26C，l000Lx条件下培养诱导愈伤 组织。 1．4调整浓度 取O．59生长良好的胚性愈伤组织，培养皿中切碎，置于o．4era间距的电激槽中，加入 用双蒸水稀释的野生稻DNA液，使其终浓度为18—20m／ml。 1．5电激处理 电场强度为750V／era。 1．6醋酶、过氧化物酶同功酶鉴定 000r／rain离心 取幼嫩U十片19，蒸馏水冲洗，剪碎入冰冻研钵中，加入缓冲液研磨，3 20min，低离子强度400V电泳5h，改良醋酸联