种属与ABO血型同时进行鉴定的新方法的研究.pdfVIP

主国鎏医堂量堑登盟生塞堕 种属和ABO血型同时进行鉴定的新方法的研究 林子清，李树，巴华杰 (中国刑事警察学院法医学系，辽宁沈阳110035) 【关键词】 法医物证学；种属鉴别；灵长类动物；ABO血型；PCR—RFLP；直接碱基测序 1990年山本等人确定了人ABO血型糖基转移酶PCR扩增后，取10山反应液用限制性内切酶 (包括d一3N一乙酰半乳糖氨基转移酶，A转移酶， 和仅一3N一半乳糖氨基转移酶，B转移酶)的DNATBE电泳液(50mmol 碱基序列，该序列被用于亲权鉴定的研究，KominatoEDTA，pH 等依据ABO血型基因的碱基序列研究了几种动物的 进化，但没有用该基因进行种属鉴别的报道¨2J。 本研究用PCR—Restriction 纯化后，用DNA碱基测序试剂盒(PerkinElmer， FragmentLengthPoly— morphisms(RFLP)方法，根据ABO血型决定基因点USA)，在960C 变异的特点，发现了一个判定并区分人、黑猩猩和绿 Elmer， 猴的方法。在此基础上，本研究还检查了几种灵长类 USA)测序。 动物ABO血型基因上长度为181个碱基对的DNA片 2 结果 段的碱基序列，分析了其进化的情况。 2．1扩增产物 1材料和方法 1．1材料 用酚一氯仿法提取10份人血液样本DNA(男性牛、狗、小白鼠、豚鼠和鸡的检材未扩增出任何 8份，女性2份。ABO基因型：从、BB、AB各1DNA片段。 份，OO、BO各2份，AO1份)，从京都大学灵长 2．2 PCR—RFLP 类研究所(犬山，日本)得到了13种共50份各种 用Hha—I消化人、黑猩猩和绿猴的扩增产物， 动物DNA(类人猿：黑猩猩20份，白长臂猿2份； 旧世界猴：狒狒、食蟹猴、日本猴、红毛猴各2份， 段，而其他动物的扩增产物则被消化成115、34和 绿猴3份；新世界猴：棉帽恒猴2份)。在各种被检 动物中，除有6只黑猩猩(2只双亲和其4只子女)化后，人和其他被检动物均被切断为123和58对碱 外，其他动物间无血缘关系。 基的2个片段，而黑猩猩的产物被切断为82、58和 1．2方法 41对碱基的3个片段，绿猴的产物被切断为69、58 和54对碱基的3个片段(图1下)。 PCR反应体系为501LLl，含有lO倍反应缓冲液 5．0山，dNTP100I山mol／L，TaqDNA聚合酶(宝酒造， 日本)2．5U，各种引物1．0mmol，模板DNA约 lOOng。950C5min．96℃24s、62℃30s、72℃1．5 min循环30个周期。所使用的引物为特异性扩增 ABO血型决定基因cDNA的第562—742位碱基(长 度为181对碱基)的引物3f和3r，其碱基序列为： 7一CGCATGGAGATGATCAGTGACTT 3f：5 C一3’：3r： 5’一GCTCGTAGGTGAAGGCCTCCC一3’。 222 法医物证学 猩猩的DNA。 在本研究中，通过PCR扩增后检查扩增产物的 有无，可排除灵长类以外的动物；通过用Mva—I和 来，特别是与黑猩猩的DNA中特异性。通过用 Hha—I进行第一次消化，人、