心血管疾病心肌细胞线粒体蛋白质组学研究.pdfVIP

O-tl fordisease mitochondrion ofsub．cellular study Proteomic analysis Huizld Yu，ZhenyuHuang，Pen93amnYang Fan，Guoan Zhang，Yarding University, ofChemistry,Fudan Department Jie Li，KeqiangWang 200433，China University,Shanghai ZhongshanHospital，Fudan 心血管疾病的心肌细胞线粒体的蛋白质组学研究 前言： 心血管疾病已经成为威胁人们生命的三大杀手之一，在工业发达的美国，目 前约有6300万人患心血管疾病，占人群总死亡数的46％。随着我国经济的发展和 生活方式的改变，心血管疾病的发病率和死亡率呈上升趋势。据“八五”攻关课题 组对我国35—59岁男女10组人群9年随访全死亡率分析，心血管疾病死亡人数占总 死亡人数的30．3％，居第二位。1985年36个城市调查：心血管疾病死亡人数占 23．39％列首位，72个县中占25．47％，也列首位。 心血管疾病的最重要最常见的病因是心肌缺血，会对心肌的代谢、功能、结 构等引起变化，造成心肌严重功能障碍，甚至坏死。心肌缺血引起的心肌结构变 化最早表现为线粒体的改变，出现从可逆性到不可逆性变化特征。由于线粒体是 细胞能量代谢中心，同时又是损伤变化的最早部位和细胞死亡的关键控制点，因 此心肌细胞生理及缺血状态下线粒体蛋白质组的分析对于心肌缺血分子机制的 深入探讨、临床指标的建立及心肌缺血治疗方法的发展有重要的理论及实践价 值。 我们在建立心肌缺血动物模型、心肌细胞培养等工作的基础上，分离正常及 缺血心肌细胞中的线粒体，运用双相电泳技术分离线粒体蛋白，比较两者电泳图 谱的异同，找出所有差异蛋白点，对差异蛋白进行鉴定，进而分析这些蛋白在心 肌缺血过程中对线粒体功能、细胞损伤、细胞保护的影响及可能机制。对心肌细 胞的代谢变化进行早期无创性检测，并与常规生化检测方法比较，为以后用于心 肌缺血病人的检测打下基础。在进一步阐明心肌缺血损伤机制的基础上，实现真 正意义上的早期无损伤检测，既有较高的理论研究价值，又有较好的经济效益， 对改善人民生活质量，提高医疗诊治水平有很大帮助。 实验： 1．SD大鼠心肌线粒体的提取： 将SD大鼠用盐酸异丙酮(O．1mg／509)全麻，开胸，取左胸室，l倍MS缓 冲液清洗，冰浴匀浆，4[3，13009离心10 min，三次，上清合并后，170009离 心15min 3次，弃上清液，沉淀即线粒体，称重。 2．双相凝胶电泳： 相使用ll％非梯度胶，恒电流方式电泳。得到的胶用考马斯亮蓝染色，GS．800 扫描仪透射扫描，得到的数字化图像文件用PDquest软件进行分析。 3．差异点的质谱鉴定： 将比较明显的差异点进行胶上酶解，毛细管液相色谱-质谱分析，通过Mascot 数据库检索，鉴定出两个差异点。 结果： 1．SD大鼠心肌线粒体的双相凝胶屯泳图： 正常大鼠心肌线粒体 心梗大鼠心肌线粒体 2．质谱鉴定结果： 对双相凝胶电泳图中标注的差异蛋白点进行了质谱鉴定，它们分别是 质谱鉴定出n2、d2