枸杞花药离体培养技术体系的建立[J].pdfVIP

一 58一 江苏农业科学 2009年第5期 枸杞花药离体培养技术体系的建立 段丽君 ，曹有龙 (1．孝感学院生命科学与技术学院，湖北孝感 432000；2．宁夏农林科学院枸杞工程技术研究中心，宁夏银川 750002) 摘要：以宁杞 1号为试验材料，探讨枸杞花药离体培养中不同激素组合、不同活性炭及蔗糖浓度、低温预处理或 热激处理、不同光照培养条件对花药培养效果的影响。试验结果表明：最佳激素组合为2，4一D1．0mg／L+6一BA 2．0mg／L，花药愈伤组织诱导率达 11．7％；4oC低温预处理 5d和32℃高温预培养 2d，均可显著提高愈伤组织诱导 率 ；添加活性炭能提高胚状体的诱导率；培养基中适宜的蔗糖浓度为3％；暗培养优于光照培养和弱光培养。愈伤组 织转入分化培养基(MS+6一BA0．5mg／L+NAA0．1mg／L)分化出大量绿色小芽，分化芽转人生根培养基(MS+NAA 0．1mg／L)中，20d后得到完整植株。 关键词：枸杞；花药；离体培养；技术体系 中图分类号：$663．904．3 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2009)05—0058—03 我国枸杞单倍体育种始于20世纪80年代 ，中国科学院 后，挑选质地较脆的胚性愈伤组织转移至分化培养基上培养。 植物研究所顾淑荣研究员首次获得宁夏枸杞花粉植株… ，樊 1．2．3 愈伤组织的分化培养及植株再生 把继代后的愈伤 映汉等通过胚状体途径获得2种枸杞植物花药单倍体 J，曹 组织 转入 分 化培 养 基 (MS+6一BA 0．5mg／L+NAA 有龙等通过枸杞花药愈伤组织细胞悬浮培养获得了再生植 0．0lmg／L+3％蔗糖 +0．8％琼llh)中，在 (254-1)cc、光照度 株 。长期以来，枸杞花药、花粉培养一直处在半停滞状态， 为2000lx、光照 12h／d的培养箱中培养。40d后统计愈伤 只有零星报道，主要原因是枸杞遗传育种长期停留在群体选 组织分化率。同时，将无根的幼苗切下，转人生根培养基 (MS 优上，创造变异群体很少，育种方法较为落后，同时，构杞花药 +NAA0．1ms／L+3％蔗糖 +0．8％琼脂)上进行生根培养。 培养再生植株诱导率总体较低，限制了枸杞花药培养研究与 2 结果与分析 应用的发展。本试验以宁杞 1号为材料 J，较系统地研究了 激素、活性炭、蔗糖、低温预处理 、热激处理等多种因素在花药 2．1 花药愈伤组织的诱导 愈伤组织诱导中的作用，以建立适合枸杞花药培养再生植株 花药在诱导培养基上培养 4～5d后，大部分的花药开始 诱导率较高的技术体系，为枸杞育种提供一种行之有效的新 膨胀，出现不同程度的卷曲，个别花药在中部出现 1滴小水 手段 。 珠，花药 由淡绿色慢慢地变成浅黄色，花药局部发生褐变。14 d后花药逐渐开裂，花药 由浅黄色逐渐变为棕褐色，有的甚至 1 材料与方法 出现黑色，随后停止生长，干瘪。21d后在褐色花药开裂和 1．1 试验材料 药壁处长出愈伤组织或胚状体，并有部分 由胚状体发育成小 宁夏农林科学院枸杞工程技术研究中心培育的优质枸杞 苗，也有部分花药保持鲜绿色，经过一段时间的诱导也会长出 新品种宁杞 1号。 愈伤组织或胚状体。 1．2 试验方法 2．1．1 不同激素组合对枸杞花药愈伤组织诱导率的影响 1．2．1 愈伤组织诱导 取长度为 5—6mm新鲜花蕾 ，在 激素对枸杞花药的离体培养起关键性的作用，愈伤组织的诱 70％酒精 中浸泡 10s，用无菌水冲洗 2次，0．1％升汞浸泡 导不仅跟激素