西臧绒山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊随机扩增多态DNA探究.pdfVIP

76 中国草食动物 2002年专辑 西藏绒山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊 随机扩增多态DNA研究 陈世林，赵书红，余梅，李盂华，李 奎 (华中农业大学畜牧兽医学院分子生物学与动物育种实验室，武汉430070) 摘要：利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对西藏蛾山羊、内蒙古域山羊、辽宁绒山羊的遗传变异进 行了分析比较．用37个随机引物和55个两两组合的随机引物组合进行筛选，筛选出了5个多态性较为 丰富的随机引物(组合)。用这5个随机引物(蛆合)对3个品种，每个品种28个个体进行扩增。据它们 的RAPD指纹圉计算了遗传距离，得到：西藏娥山羊同内蒙古碱山羊的遣传矩离为O．0876，西藏娥山羊 同辽宁绒山羊的遗传距离为01601，内蒙古域山羊同辽宁绒山羊的遗传距离为00803。这同它们之间 地理住王的远近相吻合。据刚帅指纹囤计算了西藏城山羊、内蒙古绒山羊、辽宁缄山羊的遗传变异分 剐为0．3266．0．2622，0．2475。这同它们系统选育的历史长短相一致。 关键词：随机扩增多态DNA；碱山羊；遗传变异；遗传距离 绒山羊起源于我国的西藏高原、中亚及亚洲的其 白酶K的浓度由100／tg／ml提高到12llbtg／m1．消化时 它内陆地区，现广泛分布于我国的“三北”地区。中国 间由4小时提高到6小时。 生产的山羊绒产量最高、质量最好。西藏绒山羊、内 1 2．2 PCR反应及RAPD产物的分离反应体系总 2 蒙古绒山羊、辽宁绒山羊是我国重要的绒山羊品种。 体积为25ua。其中含有10×Buffer5出，25rnMMg dNTPs 在现代育种中，从分子水平上了解它们的种质特性和 ck2．0一、2mM2”l、25tzg乍l、明胶l出、5U乍l 遗传背景就变得越来越重要。 Taq酶0．34、lO／am引物l一、10,ug／一模板DNA3pl、双 随机扩增多态DNA(Randomamptifiedpufymorpb_ic 蒸水13．2出。反应混合物用20m石蜡油覆盖。反应 DNA)是1990年由Williams等和Wdshe等几乎同时程序为：95℃热变性3min；94℃45s，37℃lmin．72r 发展起来的一种简便、快捷的检测基因组DNA多态 2min，40个循环；72℃保温7商n。 性的遗传标记技术。它通常用含10个碱基的随机引 RAPD产物用含005％澳化乙锭的I．5％琼脂． 物对目的基因组DNA进行PCR扩增，便可在多个位糖凝胶电泳分离。然后在紫外透射分析仪上观察照 点得到扩增产物。这一技术自问世～来，便得到了广 相。 泛的应用。 i．23数据处理方法对胶上清晰可辨的带进行统 1材料与方法 计分析，用软件计算遗传距离(D)和群内遗传变异 1．1实验材料 (H)，公式如下： 西藏绒山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊的血液 样品分别采自西藏阿里地区白土县绒山羊原种场的 D= 西藏绒山羊、内蒙古绒山羊原种场(伊克昭盟)的内蒙 。『∑观I 古绒山羊、辽宁省盖州市辽宁绒山羊的颈静脉血。所 l攀kj 有样品均是两代以内无血缘关系。 P1。尸z。分别为第1、第2个群体第i个位点的 实验所用引物均为美国operon公司推荐，中国 带频率，卅为统计的位点数，i为第i个位点。 科学院上海细胞所合成。PCR扩增用试剂购自大连 7m‘aPa公司。