乌蕨探究初报.pdfVIP

乌蕨研究初报 任冰如 吴菊兰 (江苏省·中国科学院植物研究所，江苏南京210014) 摘 要 测定了乌蕨Stenoloma 50％乙醇提取物对酪氨酸 chusanum(L．)Ching 酶活性的影响及乌蕨70％乙醇提取物ee总黄酮含量。以多巴为底物，加入乌蕨提 取物和蘑菇酪氨酸酶，测定A475，计算提取物对酪氨酸酶活性的抑制百分率。乌 蕨提取物经过聚酰胺柱层析，收集乙醇洗脱部分，以芦丁作标准曲线，用比色法测 定总黄酮。测得乌蕨对蘑菇酪氨酸酶活性有抑制作用，提取物浓度为200 弘g／mL时，抑制百分率为26．8％。乌蕨总黄酮含量为2．27％。 关键词 乌蕨；酪氨酸酶；总黄酮 乌蕨Stenoloma 草本，别称乌韭叫，又称大叶金花草嘲，民间还称其为小叶野鸡尾、蜢蚱参、细叶凤凰尾等。 全草入药，新鲜或晒干备用，常于秋季采收。乌蕨具有清热、解毒、利湿、止血的功用，用于治 风热感冒、中暑发痧、泄泻、痢疾、白浊、白带、咳嗽、吐血、便血、尿血、牙疳、痈肿。临床用于 治疗肠炎、肝炎等症，广泛用于解食物和农药中毒，浙江民间用于治狂犬和毒蛇咬伤。作为 一种民间中草药，乌蕨可能还有其他效用，本试验的目的在于探讨乌蕨新的用途及其有效 成分。 1 乌蕨对酪氨酸酶活性的抑制作用 1．1材料与方法 1．1．1植物材料 media(I。．) 选用了6种植物，乌蕨Stenolomachusanum(L．)Ching、繁缕Stellaria sarmentosum Cyr．、垂盆草Sedum Bunge、薇草Humulus Bidens L．、葛根Pueraria bipinnata 中国科学院植物研究所郭荣麟研究员鉴定。 1．1．2提取方法 植物材料晒干后磨成粉状，用50％的乙醇提取4h，取滤液浓缩至干，磨成细粉备用。 所有操作都在低于60℃时进行。 1．1．3样品稀释 mL 试验时称取样品细粉50mg，用2 95％乙醇65℃溶解，用25mM的磷酸缓冲液 (PBS)(pH6．8)定容至10 mI。，放置过夜，吸取上清液，最后稀释成高浓度(500／-g／mI。)、中 浓度(200p．g／mI。)和低浓度(50／,g／mI。)。 208 乌蕨研究初报 1．1．4试剂 蘑菇酪氨酸酶，购自Sigma公司，用25mMPBS(pH6．8)配成浓度为2．5 mg／100ml。的 1．1．5酪氨酸酶活性的测定 先测定A值、B值、C值和D值，以下列公式计算酪氨酸酶的抑制百分率：酪氨酸酶的 抑制百分率(％)一[(A—B)一(C—D)3／(A—B)×100 mLPBS+0．5 A值测定：0．5 mLDOPA+0．5 mL酪氨酸酶，25。C温育5min，测定 475nm处的吸光值。 B值测定：用25mMPBS测定475nm处的吸光值。 mL DOPA+0．5 C值测定：0．5mL样品溶液+o．5 mL酪氨酸酶，25。C温育5rain，测定 475 nm处的吸光值。 mLPBS+0．5mL mL D值测定：0．5 DOPA+0．5