白血病DNA异常甲基化基因的鉴定和临床意义研究.pdfVIP

2005年血液学年会论文汇编 自血病DNA异常甲基化基因的 鉴定及临床意义研究 于力赵瑜王全顺窦丽萍楼方定 中国人民解放军总医院血液科(100853) 基因启动子区DNA异常甲基化可以导致基因表达沉默，在肿瘤发生、发展中发挥着重要作用， 但是在肿瘤演变过程中哪些基因发生了DNA异常甲基化，甲基化的程度有多大以及临床意义如何， 有时很难明确。为解决上述问题我们建立了一种急性T／NK细胞白血病小鼠模型来研究基因启动子 区异常甲基化在白血病转化中的作用。该小鼠模型先经历一个白血病前期阶段，其特征是T细胞和 NK细胞在体内呈多克隆扩增并伴有明显的脾肿大，而后部分小鼠发生单克隆性增生的自血病。我 Landmark 们应用一种新的高效DNA甲基化组学研究技术RLGS(RestrictionGenomic Scanning)，对 白血病不同演变阶段的小鼠脾细胞进行DNA甲基化谱式分析。RLGS是一项DNA双向凝胶电泳技 术，在扫描图上表现为散在分布的点，每个点通常代表一个来自基因启动子区的DNA片段，一次实 验可同时对约2000个基因启动子区DNA甲基化状态进行分析。DNA甲基化发生时，在扫描图上会 出现相应的点缺失。我们对8只白血病、5只自血病前期及4只同系正常小鼠的脾细胞进行DNA甲 基化谱式分析。结果发现白血病前期与正常小鼠的甲基化谱式非常相似，在RLGS扫描图上2447个 DNA 文库对RLGS扫描图上甲基化的DNA片段进行了克隆，共克隆到55个甲基化的片段，通过序列分 片断来源于基因的5’端。应用Bisulfite ofDNA 技术对其中一个甲基化发生率高的基因ID4(Inhibitor 4)在小鼠和人的白血病细胞 binding 应用Real 例甲基化阳性的完全缓解期病人有13例在12个月内复发，而29例非甲基化病人仅3例在12个月 内复发。1D4基因启动子区DNA甲基化阳性的完全缓解期病人复发率明显高于非甲基化的完全缓解 期病人(P0．05)。应用逆转录病毒载体将ID4基因的蛋白编码区序列转入白血病细胞系，在体外及 免疫缺陷小鼠体内实验均证明ID4基因具有明显抑制白血病细胞生长的作用。本研究结果表明DNA 甲基化谱式的改变在白血病发生、发展中发挥着重要作用；[D4基因是一个新的因启动子区DNA甲 基化沉默的自血病抑癌基因；ID4基因启动予区DNA甲基化在白血病细胞中发生率高并具有肿瘤细 胞特异性，可作为一种新的基因标志用于自血病的诊断和复发的监测，具有广泛的临床应用前景。 。8。