HIV-1结构基因和白细胞介素基因在重组痘苗病毒中的共表达研究.pdfVIP

竺 竺竺竺兰竺兰：竺兰!#兰!!兰竺!竺兰!竺竺竺竺竺兰!兰竺竺：!竺翌：!!兰：! ·研究筒报· HIV一1结构基因与白细胞介素基因在重组 痘苗病毒中的共表达研究” 王玉圭【’。 奎宁 李体远。’ 王宏伟 王弘邦。。 刘素襄。+ 萍 安汝田’。 殷震 (■敏军 研究所病毒窀长春130021) Env糖蛋白是决定HⅣ病毒粒子感染、穿物的分子量分别为24kDa、26k隗。用同样的方 人、融合及抗原性的主要结构蛋白。并且司诱导机 法．将编码人白细胞介素2(hlL一2)的基因片段 体产生体液免疫和细胞免疫。Gag蛋白是hⅣ主克隧到真核表达质粒pJ38cnv的下游，构建成含 要结构蛋白之一，氨基酸序列较为保守，抗躯决定 有HⅣ一1env和hIL一22种外源基因的重组表 簇较少变异，也能够诱导机体产生体旅免使和细 达质粒pJ38E—IL2，经同源重组和血凝素阴性空 胞免疫。利用G皑蛋白研制巨分子颗粒化疫苗， 斑筛选，获得了重组痘苗病毒vJ38E—IL一2。经 可能克服env不有效抵抗异源变异毒株攻协的缺 检测证明。重组病毒能同时表达env蛋白和儿一 陷，这是近年来HⅣ疫苗研制新热点。在靛滋病 2蛋白。表达产物分子量分别为98kDe、16kDe。 的研究中。已成功地利用痘苗病毒表达了：HIv一 用此2种重组病毒免疫小鼠，用MTT法检铡了 脾及外周血细胞对有丝裂源刺激的细胞增殖反 1Gag、Env等蛋白。随着生物技术的发展，Jk们设 想把细胞因子基因与某些外源目的基因在细胞中 应。用境式细胞仪检测Ⅱ)4+、CD8+T淋巴细胞。 进行共表达，来增强免疫反应．现已证明多数细胞 结果表明细胞免疫应答增强，并可产生抗HIV— 因子具有良好的免疫佐剂性能．佐剂对机体的作 lenv抗体，此种方式表达的细胞因子持续释放可 用能引起细胞的侵润，增强细胞免疫和体涮免疫， 产生更强的免疫效果。我们构建的表达质粒 调动机体发挥更大的免疫力，并能改变细胞的免 HIv一1结构基因与白细胞介素基因间含有一段 十几个碱基组成的多克隆位点。这段碱基多克隆 疫功能。因此我们将IL一2／IL一6与HⅣ卜1结 构基因在重组痘苗病毒中共同表达，可使机体内 位点表达的蛋白，可能为2个开放读框蛋白的形 持续存在一定浓度的内源性细胞因子，通过细胞 成提供了足磐的空间及柔软性，能使2种外源蛋 因子间网络作用关系以达到有效治疗的目的。 白各自折叠成有活性的蛋白分子，保证了外源蛋 本实验以痘苗病毒复制非必需区倒凝素 白肤链各自折叠成天然的二级和三级结构。在保 (HA)基因作为侧翼，把编码人自细胞介素Ii(hlL证生物学活性韵正常发挥中可能起到一定作用。 一6)的基因片段克隆到真核表达质粒p16(’F1— 以上结果表明。构建的HIV—lenv／p249ag 24的下游，构建成含有HIV—Ip249ag和hjL一6 不同结构基因和不同细胞因子IL一2／几一6基因 2种外源基因的重组表达质粒p16e援24一II悔，经 共表达的重组痘苗病毒，均表达了2种外源目蚤 同源重组和血麓素阴性空斑筛选，获得了劁组痘 白，免疫小鼠后，含细胞因子佐剂重组；旁毒增强了 苗病毒v160．F24一IL6。经间接免疫荧光试验、 机体的细胞免疫及俸液免疫应答。这项实验为开 Dot—ELISA和westembott等检溯证明，虱组病 发AIDS病毒基因工程疫苗提供良好的技术数