超氧阴离子自由基微传感器的研制和其在心肌细胞研究中的应用.pdfVIP

电分析化学进晨·1999 C18 超氧阴离子自由基微传感器的研制及其在心 肌细胞研究中的应用 薛建应向阳陈俊水王 琳金利通 (华东舜范大学化学与生龠科学学院 上海 200062) 近年来*自由基特别是超氯阴离子自由基(Oi)，在心肌细胞缺血和再灌流损伤研究中受 到广泛关注Ⅲ．在生物体内超氧阴离子自由基浓度约为10“一10-‘rnoI．L～，为了测定并获得 活体信息，必须建立一种高灵敏度、高选择性、易翻备、体保小及响应时间短的测定方法。化学 发光法01和电化学分析o。1等方法已在近期的一些研究中被运用。但预处理复杂，且很难适用 ’ 于活体分析． 本文研制了一种以碳纤维为基底电掇，Cu／Pt檄粒为修饰荆[5]，聚吡咯(PPy)为保护膜的 新型的超氯阴离子自由基超徽传感器．实验表明该超微传感器具有很好的灵敏度和选择性。用 该传感器检测了心肌细胞刺激后释放的超氧阴离子自由基，获得满意的结果。 将经预处理后的电极放在古有1mm01．L-1CuCl2、1mm01．I。_1K：PtCl¨0．1mm01．I，_1 再在古O．25m01．L“毗咯的水溶液中电聚合一层PPy。即铡得超氧阴离子自由基徽传感器． 超氧阴离子自由基是由黄原呤(xA)和黄嘌呤氧化酶(xOD)模拟生化反应产生的。在xA 被XOD氯化生成尿酸的反应中，超氯阴离子自由基是该过程的中间产物。 图1所示为Cu／Pt-PPy修饰徽传感器对超氧阴离子自由基的电催化特征。高分散度的金 属徽粒增大了表面积，因而大大提高了电催化活性。为了进行活体实时分析，该传感器必须能 排除生物组织中其它电活性物质的干扰。研究表明PPy不仅能防止诸如多巴胺等大阳离子的 扩散，而且可以减少传感器的污染．图2显示连续注人XA时，氧化电流显著增大，且微传感器 的稳态电流同超氧阴离子自由基的浓度成正比。当信噪比为3时，该传感器的检测限为 24nm01．L～。由于该传感器不同于酶电极，因而不受酶的活性的影响，当传感器在O．0到+ O．8V之问循环扫描5h后，电流仅下降12％；当传感器保存在HBSS溶液(4{c)中1个月后。 电流下降16％，这说明该传感器具有较长的使用寿命． 心肌细胞贴壁培养48h后，在相差倒置显徽镜下将三电极体系置于心肌细胞附近．采用 DPA检测细胞被刺激前后培养液中超氧阴离子自由基的变化。以乙酰胆碱(10pm01．I。。)作 刺激物时，当加入15Ⅲ刺激物后，心肌细胞释放产生的超氧阴离子自由基被检测到。平行进行 三次实验。溶液中的超氧阴离子自由基的平均浓度约为6．2×10川m01．L～。 ·176- 电分析化学进展·1999 ●● -．歹形 《aoo一＼～ 夕 ● ‘■‘*^■^■●●●■●■●■ 五／V 田2超簟胡青子茸由基在蠹传矗■上的DP^■虚 圈l超■阴■子自由董在(-)棵电极。(b，c)散传寤 ■上的■环伏安一应 每次茬台o．005ux0D的HBss溶液中注^1．o× 10‘m“．L1)【A． 超氯明膏子自由基浓度分辫为(b)仉OmoI．L‘，(a，c) 5．OmoJ．L·扫蘧为100mV．8‘ 参考文献 et 1．FernriR、o}∞血C、Cu弛noS81．AmJa讯Nutr，1991，53：215S 2-Zweier MLProcNahA舶dsci J JT、We甜eldt USA，1987·84：14“ L，FlBherty 3．I．vovicb V、sch钟“耻A．A珊lChem．1997，69；454 4