1%2c2%2c4-三羟基蒽醌-铍-DNA体系荧光增强的研究和其应用.pdfVIP

——坌堑些兰塑些塾童垫些 1,2，4-三羟基蒽醌一铍-DNA体系荧光增强的研究及其应用 蔺存国1张桂玲2杨景和， (‘中船重工集团第725研究所青岛分部青岛266071) (2青岛海洋大学化学化工学院青岛266003) (3山东大学化学系济南250100) 关键词1’2，4．三羟基葸醌铍DNA荧光探针 1实验部分(咖 2结果与讨论 2．1荧光先-谱 480rm、510 nm、590 nm和565 nnl，在加入Bet艺后．它的激发和发射峰的荧光强度、光谱的 形状和摄大波长都几乎没有改变，这种荧光属于L+．L发光。而在THAQ．Be2+．DNA体系中， 510 nrn处的激发峰和565 nm处的发射峰的荧光强度有了显著的增强，但峰形并没有改变。这种 nrn， 荧光增强表明THAQ-Be2+和DNA发生了较为明显的相互作用。在本文中，我们选择k=510 565 儿f nm的峰来进一步研究。 2．2影响体系荧光强度的因素 2．2．i pH和缓冲溶液 实验表明．在p}{一3．6～pH叫．5范围内．体系的荧光强度能够达到最大，本文将缓冲溶液的 pH固定在4_3。不同的缓冲溶液对体系的荧光强度也有不同的影响，结果表明Tris-HCl是比较 理想的。 2．2．2 TH^Q和Be“浓度的影响 结果表明．当二者的浓度比为l：1，且在1．00×10～mol／L～2．50×10-5mol／L范围内时． x 和1．001015motrt,。 2．2．3盐浓度的影响 本文利用NaCI来研究盐浓度对体系荧光强度的影响，结果表明随着盐浓度的加大，体系的 荧光强度呈显著下降趋势。 2．2．4溶刺极性的影响 实验结果表明．随着溶剂极性的增强，THAQ-Bd+的荧光强度逐渐下降，这说明疏水性环 境有利于7FtAQ-B矿的荧光增强。 2．2．5 RNA的影响 结果表明在同样的条件下，RNA对THAQ-B矿的荧光无影响，因此可咀在RNA存在的情 况下对DNA进行测定。在实验中发现，在不干扰DNA测定的情况下，RNA相对于DNA的最 大允许过量为2．5倍。 2．3稳定性实验 固定体系的pH值为4．3，对体系的稳定性进行了实验。结果表明当所有的试剂加入后，体 373 舟析化学的成就与挑战 系的荧光强度在5 mtn。 m．m内达到最大并且能够保持稳定30 2．4身毋隅[用 2．4．1工作曲残与检出限 在体系的最佳测试条件下．按操作步骤绘制了鲜鱼精子DNA的工作曲线。结果表明．在 0．03 pg／mL～lS pg／mL的范围内，线性关系非常好．相关系数为0．998 9，检出限为2．8×l旷g／mE (S甜=2)。 2．4．2回收实验 利用本方法对四种不同浓度的鲜鱼精子DNA(台有2．5倍酵母核糖核酸RNA)合成样品进 行了回收实验，结果在96．5％～99．8％之间。 2．5机理讨论 通常小分子物质与DNA的结台有三种方式：即插入、沟槽和静电作用。在本实验中，由于 RNA和DNA对体系荧光的影响差异较大．所以可推断磷酸根静电作用并不是造成该体系中荧 光增强的原因；而通过本实验体系的吸收光谱既无最大吸收波长的红移又无减色效应则可以推断 它们之间的作用也不是插入式结合。 中的1．和2-位E的司lH银可能与B矿结合，雨舢位匕的羟基卿J与DNA碱基上的N贩子以氢键 方式结合。所以，我们推断在这种结合方式中。含有羟基的苯环的位置是在DNA沟槽的底部并 且靠近碱基，而其余的两个苯环则可能是靠近沟槽的内壁．因此，在THAQ-B矿-DN