超临界CO2萃取技术在云南红豆杉化学成分研究中应用.pdfVIP

超临界C02萃取技术在云南红豆杉 化学成分研究中的应用 林秀仙史庆龙梁宝钻李菁沈永康葛发欢 广卅I市医药工业研究所 广 金雪松 华安超临界萃取有限公司 海安226682 摘要 CarbonDioxide 采用超I临界c02萃取(supercritjcalExtraction)技术对云南红豆杉化学成分 进行了研究，从中分离鉴定了B一谷甾醇和紫杉醇两种成分。其中用超临界C02萃取可直接得到 13～谷甾醇单体。紫杉醇的分离虽然结合了传统的柱层析方法，但分离步骤比纯传统法大为简 化。 关键词 超临界C02萃取云南红豆杉紫杉醇B～谷甾醇 超临界C02萃取分离技术已在天然产物提取中广泛应用，它克服了常规方法提取 的有效成分杂质多、提取分离步骤繁杂等缺点。 1971年，Wani[11及其同事从欧洲短叶红豆杉(Ta)(us brevifolia)中分离得到一种具 由于天然含量极低，在当时并未引起人们的注意。直到1971年，Horwitz博士发现其 抗癌机理是抑制癌细胞的快速繁殖【2j。这一机理与纺锤体毒性的抗癌药物(如长春新 碱和秋水仙碱)的作用机制恰好相反。肿瘤学家认为紫杉醇是近年来已发现的最好的 抗癌药物之一。其独特的抗癌机制和无与伦比的抗癌效果引起了随后20多年对该属 植物的深入研究。但由于紫杉醇在植物中的含量极低，提取工艺十分复杂和要用氯 仿等有毒的有机溶剂，且资源短缺和水溶性很差，远不能满足临床用药。B一谷甾醇 有降胆固醇、抗癌、被动痰止咳的功能。 为了更好地开发利用，我们用超临界C02萃取分离技术对该植物进行化学成分的研 究。本文主要报道B．谷甾醇和紫杉醇的分离鉴定。 1 材料和仪器 (AR)，均为市售；5升超临界C02萃取仪(自行设计，由华安超临界萃取有限公司加 DRX 400核磁共振光谱仪。 2 提取分离 升温加压，当温度及压力达到设定程度时，开始循环，同时加入95％乙醇作为夹带 一119— 剂，有关萃取参数见下表。 表 云南红豆杉树皮的超临界C02萃取参数 分离柱收集的萃取液，放置，析出结晶，过滤，洗涤，用乙醇重结晶，最后得 取白色粉末状结晶I，经薄层检验为单一斑点。 解析釜I收集到的萃取物，行硅胶G000—200目)常压柱层析，以正已烷-丙酮一甲 醇进行梯度洗脱。收集流份并经薄层检验，合并相同组分。经薄层显示具有紫杉醇 斑点的组份浓缩后，行硅胶G(200-300目)加压柱层析，以二氯甲烷．甲醇洗脱，收集 含紫杉醇洗脱液，浓缩至适量，放置，白色晶体析出，用含水甲醇重结晶得到白色 结晶1I。经薄层检验为单一斑点。 3．鉴定 3．1结晶I的结构鉴定 结果I为白色粉末状结晶(乙醇)，易溶于氯仿，难溶于乙醚、甲醇和水，与标准 品0．谷甾醇进行薄层层析对照，两者斑点位置～致；熔点为138．140。C，与标准品进 行混合熔点测定，混合熔点不下降；并进行红外光谱检测，与标准品的红外谱图一 致，证明结晶I为13．谷甾醇(B．Sitoster01)，结构如下： H 3．2结晶H的结构鉴定 结晶II为白色晶体(含水甲醇)，易溶于氯仿，难溶于水；熔点为214—216C，与紫 杉醇标准品的混合熔点不降；将结晶II与紫杉醇标准品进行红外光谱及TLC对照，结 果两者红外光谱一致，TLC显示相同的斑点；将其与标准品进行1HNMR光；谱比较，两者 完全一致，确证该结晶为紫杉醇(Tax01)。结构如下： ，120． ACO 4 结果与讨论 用超临界C02萃取技术从红豆杉树皮中提取紫杉醇，国外亦有报道。1992年， Jennings等[31利用SFE技术萃取法进行提取紫杉醇的研究，树皮中大部分紫杉醇都能 得到有效