贝氏柯克斯体抗原诱导人树突状细胞活化地研究.pdfVIP

2010年中国人兽共患病学术交流会论文摘要集 用靶标为基础的新药创制将是动物体内外抗寄生虫药物研究的重要方向。 贝氏柯克斯体抗原诱导人树突状细胞活化的研究 王 颖 吴德平 王锡乐 熊小路 温博海 军事医学科学院院微生物流行病研究所 病原生物生物安全国家重点实验室 贝氏柯克斯体(Coziella burnetii)为Q热(Qfever)病原体，专性胞内 寄生的革兰阴性嗜酸菌。树突状细胞(dendriticcells，DCs)作为吞噬细胞的 一种，是体内专职的抗原提呈细胞，在启动和调节免疫反应中发挥关键的作用。 本研究从人外周血分离单核细胞诱导分化成DCs，用贝氏柯克斯体外膜蛋白 Coml、Ⅳ分泌系统蛋白IcmO、增强入侵蛋白EnhA、蛋白输出蛋白SecB、外膜脂 质载体蛋白LolA以及热休克蛋白HspB分别刺激人源DCs。结果显示Coml激活 DCs能力最强，它所激活DCs的表面分子表达水平最高；SecB激活DCs能力仅次 均表达高水平的细胞因子IL一12，而HspB刺激诱导出的不成熟DCs表达高水平 细胞因子IL一10。表型成熟度与表达细胞因子的不同表明Coml、SecB、HspB刺 激的DCs处于不同活化状态，提示贝氏柯克斯体不同蛋白抗原刺激的DCs可以表 现不同的免疫调节能力。 T细胞的活化也显示出明显惰性，T细胞表面早期活化标志物CD69的表达仅有限 上调，对T细胞的增殖毫无作用，表明HspB不具有启动机体细胞免疫功能。Coml 激活DCs和SecB激活DCs均显著提高T细胞表面CD69表达；使T细胞处于活化 101 2010年中国入兽共患病学术交流会论文摘要集 导机体产生特异性细胞免疫应答能力，为贝氏柯克斯体保护性抗原。 基因芯片分析单核细胞内贝氏柯克斯体毒力相关基因表达 王世斌 王锡乐 熊小路 温博海 病原生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院院微生物流行病 研究所 fever)病 贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)是重要人兽共患病Q热(Q 原体，为专性胞内寄生的革兰阴性嗜酸茵。贝氏柯克斯体的高致病性和对环境、 理化因素的高抵抗力使其被认作重要的生物战剂／生物恐怖剂。本研究基于国外 发表的贝氏柯克斯体全基因组序列，采用PCR扩增它的粘附、侵袭、宿主细胞内 移动、宿主细胞修饰等毒力相关基因，并用扩增的毒力相关基因构建基因芯片。 采用该基因芯片在mRNA水平分析感染单核细胞贝氏柯克斯体毒力相关基因的表 达。 贝氏柯克斯体全基因组约有2百万个碱基对，含2000多个基因，其中约160 个为毒力及毒力相关基因，编码类军团菌毒力相关因子、Ⅳ型分泌系统蛋白、分 泌性蛋白和膜蛋白等。这些毒力和毒力相关基因与贝氏柯克斯体的致病性和免疫 性密切相关。本研究选择166个贝氏柯克斯体的毒力相关基因。以Primer5．0 软件设计引物。以贝氏柯克斯体九里株的全基因组DNA为模板扩增目的基因。以 SpotArrayH24点样仪将这些基因点在氨基化玻片上制备贝氏柯克斯体毒力相关 基因芯片。 我们采用贝氏柯克斯体毒力相关基因芯片、在mRNA水平对贝氏柯克斯体体 外感染单核细胞24h内的毒力相关基因的表达进行了系统分析。芯片分析发现贝 氏柯克斯体16个基因在感染单核细胞的24内得到显著表达。基因功能分析发现， 这些毒力相关基因表达产物与贝氏柯克斯体细胞内入侵、削弱吞噬细胞内杀菌／ 抑菌作用、适应吞噬体／吞噬溶酶体内生存环境、增强菌体复制有关。 102