LC%2fMS%2fMS结合主成分分析(PCA)用于鼠尿中灯盏花素代谢组学地研究.pdfVIP

2005年 10月 第三届全国微全分析系统学术会议论文集 湖北武汉 LC/MS/MS结合主成分分析(PCA)用于鼠尿中 灯盏花素代谢组学的研究 冉小蓉1，司圣柱1.2，梁琼麟1罗国安1. (1.清华大学化学系，北京 100084;2.安徽教育学院，安徽 230061 摘要:在药物开发过程中，了解药物体内代谢途径和对药物进行安全性评价是一个耗时冗长的过程. 本文介绍7将LC/MS/MS结合多元数据分析用于灯盏花素代谢组学研究，同时实现了快速寻找药物代 谢产物和受药物干扰而发生变化的内源性物质，其中，找到了两个可能的药物代谢产物，九个导致 雌雄差异和一个导致剂量差异的内源性物质，一方面证明了MS是代谢组学研究的有力手段，另一方 面也表明借助代谢组学的研究可以大大加快药物开发的过程. 1试验部分 仪器:Agilent1100seriesLC/MSDTrap。色谱条件:色谱柱3.9mmX15cmWatersX-TerraRP C185um;流动相:A=O.l%甲酸水，B二纯乙睛。动物试验:18只Wistar老鼠(170-200g)分为 三组:对照组(4male,3female)，低剂量组(20mg/kg,2male,3female)和高剂量组(40mg/kg,3male, 3female)，通过尾静脉注射灯盏花注射液，连续给药3天，处死，收集膀脱中的尿液，-20℃保存。 分析前室温溶化，13000r离心5min，二次水稀释4倍，进样。 2结果与讨论 NMR一直是代谢组学研究的一个重要手段a1-21，然而，与MS相比，NMR存在灵敏度低、不能 检出不含氢基团(如S042-)等不足。本文将液相与质谱联用，通过快速梯度洗脱实现高通量分析 并可消除离子抑止效应，分析用时 ]Omin，质谱采用负离子模式。典型的对照与给药样本的基峰离 子色谱图见Figure]，仅通过目视对比很难找出二者的具体差异。将所有样本的质谱图分六个时间段 导出进行PCA分析。其中，3-5min质谱数据PCA分析的结果见Figure2oPC]和PC3的得分图将雌 雄样本明显分为两个组 (雄性样本集中在椭圆圈中)。此外l.5-3min,5-6min,8-9min的分析结果也将 雌雄样本分为两个簇。再通过负载图找到引起差异的各m/z值，结果见Tablel。这些结果表明，给 药后，样本受药物干扰而作出相应的内源性代谢响应会因雌雄个体的差异而有所不同。 .9Control Dosed Fig.IComparisonofnegativeionBPCLC/MSchromatograrnsrfomdosedandconrtolwinesamples 通讯联系人:罗国安 基金项目:科技部十五攻关项目(No.2004BA721AB) 2005年 10月 第三届全国徽全分析系统学术会议论文集 湖北武汉 6-7min质谱数据PCA分析的结果见Figure3rPC1和PO的得分图将对照组与给药组完全分开。 通过负载图找到导致差异的两个化合物:m/z339和m/z285，发现这两个化合物只存在给药样本， 不存在空白样本，这样就可以推测它们为灯盏化素的代谢产物。文献曾报道了其中一个代谢产物m/z 28尹!，证明了我们的推测.此外，7-8min质谱数据PCA分析区分出高剂量与低剂量组，m/z567是 导致差异的内源性物质。 栩 ︵ 承 0 芯 几 . 啥 白 划 仰 却 。 ︵ n 承 柑 5 艺 睡 枷 枷 劝 助 咖 。 汀 门2 月0 _1口期】 习目 月以泊 名即 .成幻 -T,幻