L-谷氨酸生产菌的选育和其发酵条件的研究.pdfVIP

L一谷氨酸生产菌的选育及其发酵条件的研究 陈 宁 张克旭 (天津轻工业学院食品工程系天津300222) 王东洋 李建河 (山东菱花集团公司济宁272013) flavum)T1为出发fi椿，根据代谢控制发酵原理。 摘要采用黄色短杆菌(Brevibacterium 利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变，定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度 TG961为亲垛．通过原生质体融合技术，成功地选育出了产酸枣高的融合子CNl021，并且诙 菌株系温度敏恙型菌株．可用于谷氮酸强制发酵．在摇瓶条件下，产酸达13．69／dl,在6m3发 酵罐上进行中试，产酸达14．69／dl，转化率达62％． 关键词温度敏感突变椽}育种；发酵 1 引言 自1957年木下、朝井等人创立微生物发酵法生产氨基酸以来，迄今已有四十 多年的历史．经过各国科学家的不懈努力，在全世界已建立了完整的氨基酸工业 体系。对于利用微生物进行工业发酵来说，完全可以在不改变现有发酵设备的条 件下，通过改进生产菌株来大幅度的提高氨基酸的产量和质量。因此，优良生产菌 um ilavum)T1为出发菌株，根据代谢控制发酵原理，利用紫外线、硫酸二乙酯进行 诱变，定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感型突变株 菌TG961为亲株，通过原生质体融合技术，成功地选育出了产酸率高的融合子 CNl021，并且该菌株系温度敏感型菌株，可用于谷氨酸强制发酵。在最佳条件下， 谷氨酸产酸率达13．6％，糖酸转化率达60％以上． 2材料与方法 2．1材料 菌种 flavum)Tl 黄色短杆菌(Brevibacterium 天津短杆菌(Brevibacterium tianjinese)TG961 以上菌种均为天津轻工业学院代谢控制发酵研究室保存菌种。一 2．2方法 ‘ ·13· 1．DES诱变 采用l％DES进行诱变，测定不同诱变时间的杀菌率，绘制致死率曲线。具体 ’ 诱变过程如图1所示。 2．紫外线诱变 采用15W紫外灯，照射距离30cm，测定不同照射时间的杀菌率，绘制致死率 曲线 新鲜活化斜面 l 肉汤 32℃，96诜，分i培养6小时 茁液 ’ 取10“离心l弃去上潘液 ， 百体 ’。’ ①pH7．o磷酸缓l冲液洗涤2设 ②磷酸缓冲液均l匀悬浮后取4ral 250mI带玻璃珠三角瓶 (装有16mlpH7．0磷酸缓冲液) o．2mlDES l原液 32℃恒温振荡诱