基于关键酶表达的发酵调控与分子改造策略对E. coli 产丁二酸的影响.pdfVIP

第３３卷第３期 南　京　工　业　大　学　学　报　（自然 科 学 版） Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．３ ２０１１年５月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ２０１１ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７６２７．２０１１．０３．０１２ 基于关键酶表达的发酵调控与分子改造策略对 Ｅ．ｃｏｌｉ产丁二酸的影响 马江锋，梁丽亚，刘嵘明，张　敏，陈可泉，姜　岷，韦　萍 （南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 ２１０００９） 摘　要：考察Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００１及其重组菌株Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００２生物发酵生产丁二酸的性能。Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００１在两阶段发酵产丁二 酸过程中通过在有氧培养阶段添加乙酸钠，即可提高丁二酸的生产能力，厌氧阶段的丁二酸收率可达８４％，但会有较多的 副产物乙酸和丙酮酸积累。以Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００１为出发菌株，敲除其磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ＰＰＣ）并导入来源于枯草芽孢 杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶（ＰＣＫ）基因，构建了重组菌株Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００２，该重组菌株在两阶段发酵的有氧培养过程 中不需添加乙酸钠，转厌氧后菌株也具有转化葡萄糖合成丁二酸的能力，丁二酸收率可达８６％，副产物积累很少。 关键词：两阶段发酵；大肠杆菌；丙酮酸羧化激酶；丁二酸 中图分类号：ＴＱ９２１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１６７１－７６２７（２０１１）０３－００５８－０４ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎ ｓｕｃｃｉｎａｔｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＥ．ｃｏｌｉｂａｓｅｄｋｅｙｅｎｚｙｍｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＭＡＪｉａｎｇｆｅｎｇ，ＬＩＡＮＧＬｉｙａ，ＬＩＵＲｏｎｇｍｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＭｉｎ，ＣＨＥＮＫｅｑｕａｎ，ＪＩＡＮＧＭｉｎ，ＷＥＩＰｉｎｇ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｗｏｓｔｒａｉｎｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇＥ．ｃｏｌｉＪＭ００１ａｎｄｉｔｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎＥ．ｃｏｌｉＪＭ００２ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｕｃｃｉｎａｔｅ．ＴｈｅｎｅｗｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｏｆＥ．ｃｏｌｉＪＭ００２ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆＰＰＣｇｅｎｅａｎｄｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＣＫｇｅｎｅｆｒｏｍＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ１６８ｂａｓｅｄｏｎＥ．ｃｏｌｉＪＭ００１．Ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ００１ｏｆｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｕｃｃｉｎａｔｅｃｏｕｌｄｂｅｅｎｈａｎｃｅｄｗｈｅｎｇｒｏｗｅｄａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙｏｎｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅｄｕｒ ｉｎｇｄｕａｌｐｈａｓｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｍａｓｓｙｉｅｌｄｏｆｓｕｃｃｉｎａｔｅｄｕｒｉｎｇａｎａｅｒｏｂｉｃｐｈａｓｅｒｅａｃｈｅｄ８４％．Ｔｈｅ ａｃｅｔａｔｅａｎｄｔｈｅｐｙｒｕｖａｔｅｗｅｒｅｔｈｅｍａｉｎｂｙｐｒｏｄｕｃｔｓ．ＷｈｅｎｄｕａｌｐｈａｓｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｈＥ．ｃｏｌｉＪＭ００２ ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｗｉｔｈｏｕｔａｄｄｉｎｇａｃｅｔａｔｅｄｕｒｉｎｇａｅｒｏｂｉｃｐｈａｓｅ，ｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅｃｏｕｌｄｂｅｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｄｔｏｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｕｎｄｅｒａｎａｅｒｏｂｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｉｔｈａｈｉｇｈｙｉｅｌｄｏｆ８６％，ａｎｄｌｉｔｔｌｅｂｙｐｒｏｄｕｃｔｓ（ａｃｅｔａｔｅａｎｄｐｙｒｕｖａｔｅ）ａｃｃｕ ｍｕｌａｔｅｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｄｕａｌｐｈａｓｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ；ＰＥＰｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ；ｓｕｃｃｉｎａｔｅ 　　丁二酸是一种重要的Ｃ平台化合物，不仅可以 丁二酸主要采用化学方法生产，污染大、成本高，制约