格尔德霉素抗单纯疱疹病毒1型作用机制地研究.pdfVIP

格尔德霉素抗单纯疱疹病毒1型作用机制的研究 李玉环陶佩珍蒋建东 (中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050) 在抗生素及抗菌药物迅速发展的今天，病毒性传染病已跃居传染病之首，虽然疫苗在控制病毒 性疾病方面发挥了巨大的作用，但由于病毒易突变，给疫苗研究带来很大困难。因此研究高效低毒 的药物成为当今国际热点，自80年代初期至今，抗病毒药物已有了突飞猛进的发展。 目前临床上应用的抗病毒药物已有50多种，其中以抗艾滋病的药物发展最快，已上市24种， 其次为抗疱疹病毒药物也已上市19种。抗病毒药物一般设计为作用于病毒的蛋白，大多数为核苷类 药物，其作用靶点均为病毒复制过程中的关键酶。但是这些作用于病毒蛋白的抗病毒药物也面临巨 大的挑战。首先是病毒突变，耐药性已成为临床的主要问题，在寻找新的抗病毒药物时，必须对此 问题予以高度重视。其次作用于病毒蛋白的药物的抗病毒谱窄，只作用于一个病毒家族或者密切相 关的几种病毒。第三，有些病毒如人类免疫缺陷病毒整合到到宿主的基因组中，现有的药物对整合 到基因组的病毒没有治疗效果。第四，药物的毒性问题，许多抗病毒药物不良反应都很严重。第五， 小病毒只编码有限的几种蛋白，因此能够作为药物靶点的病毒蛋白的数目也是有限的。因此寻找新 的作用靶点，开发设计新机制药物，找到高效、低毒、特异的抗病毒药物极为重要。 抗生素作为抗菌药物一直发挥着巨大的作用，它以其筛选方法成熟、资源丰富及作用机制广泛而备 受青睐。但抗病毒抗生素的研究进展比较缓慢，至今报道的有抗病毒活性的抗生素已有230多种， 其中绝大多数是在抗癌物质筛选过程中得到的，后来发现具有抗病毒活性，虽然已经发现了许多具 有抗病毒活性的抗生素，但真正在临床上有实用价值的抗生素却非常少见。 物，具有抗病毒活性，经过化学分离、纯化、结构分析，发现该活性产物均为格尔德霉素 合，从而抑制分子伴侣的功能[1】。GA的处理会导致与Hsp90结合的底物蛋白的功能丧失和快速降 解[2，3】。 我们首次发现其在体内、外有明显抗病毒复制作用，在多种动物模型内也证实GA抗病毒疗效， 模型及乳牛牛乳头纤维瘤等模型中GA均有较好的抗病毒作用。 1．材料与方法 Canine 1．1细胞：非洲绿猴肾细胞(Vero)和Madin—Darby Kidney(MDCK)细胞为本室传代保存， 人胚肺细胞HEL由本室从胎儿原代培养中建立，Vero．E6细胞由军事医学科学院五所杨佩英教授惠 SMEM培养液，在37C，5％C02培养箱中培养，每三天传代一次。 3繇 次冻融后离心(3000rpm，10min)，取上清，分装后．86℃保存。 HSV-2 333株和SAV株，CoxB1，CoxB3，Cox 原代细胞扩增外，其余病毒均在Vero细胞中扩增。 SARS—coronavirus为非典期间从北京的非典患者分离的流行株。 HIV-1为美国科罗拉多医学中心张兴权教授保存毒种。 院实验动物中心(北京)。 LM惠赠。 质粒：质粒prpTK和pTRI—GAPDH由Dr．Schang 1．2 方法 1．2．1 药物毒性：用MTF法检测。 1．2．2 体外抗HSV-1作用：空斑滴定法。 1．2．3 体内抗HSV-1作用：HSV-1小白鼠脑炎模型 1．2．4 药物对HSV-1吸附、穿入和释放的影响：见文献【4】。 1．2．5 感染后不同时间加药对HSv-1的影响：一步生长曲线法。 1．2．6 GA对细胞周期的影响：流式细胞仪分析细胞周期。 1．2．7 GA对感染细胞中HSV-1复制的影响：Southernblot法。 1．2．8 GA的体外抗病毒谱：除HIV-1采用p24抗原测定法外其余均采用细胞病变CPE法。 1．2．9 耐药突变株的分离：病毒在药物存在下在敏感细胞中连续传代。 2． 实验结果 2．1．药物毒性 GA对Vero细胞的毒性是用MTT方法检测的，GA的CC50为3501aM。 2．2体外抗HSV-1作用 2．3GA治疗小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的疗效 LD50 用5．6 染的小白鼠的存活率。GA对小白鼠的半数致死剂量急性LD50为15．5