高效液相色谱法测定精浆辅酶Q10水平与其在不育症研究中的应用.pdfVIP

·58 人IL一5诱导的STAT3酪氨酸磷酸化 李玲张平魏大鹏章崇杰蔡美英张峻梅 JAK(Janus tra／lsdtlcl!fs Kinase，JAK激酶)一SrAT(signal 过夜。TBST洗膜，先后加入生物素化羊抗兔IgG和碱性磷 and activatorsof transcription，信号转导及转录活化因子)途 酸酶标记的亲合素进行结合，用NBT／BCIP底物显色。 径是细胞因子(cytokine，CK)胞内信号传递的重要途径。二、结果 STAT3蛋白是STAT家族的重要成员，它广泛表达于哺乳动 Blot 物的多种细胞和组织中，在早期胚胎发育和骨髓细胞的分化 中发挥着不可缺少的重要作用，并调控着细胞的生长、分化、 增生、恶性转化、凋亡抑制及能动性等生理功能。STAT3主达情况。显色后发现每份样品的膜上均有三条颜色较深的条 要有旺和口两种亚型。其中，STAT3a主要与细胞的增殖和转 带。根据分子量marker的位置计算，上方两条带的分子量约 化有关，STAT38则可能与细胞的分化有关。检测细胞内 STAT3及其他信号转导分子的活化水平，对于进一步阐明疾 病的发病机制、深入了解疾病的发展状况、更准确地评估疾病 的预后及寻求新的治疗途径均具有重要意义。 测结果与之相符(图略)。 一、方法 1．STAT3的活化：培养人早幼粒细胞自血病细胞株HL- 60细胞。选择处于对数生长期的细胞，平均分为5组，分别 b组细胞为不加刺激的对照组，c、d、e组细胞分别用1．0、10、 用m-5(浓度分别为0，0．1，1．0，10，100ng／m1)刺激20100ng／mlhIL-5刺激。根据条带的面积和颜色深浅可以看 分钟。 2．IP：细胞浓度调节为2．O(107个／ml，每份样品1．0ml。的Y705位点发生酪氨酸磷酸化。 A^A． 用裂解液处理后离心取上清。将STAT3抗体和protein garose混合，制备抗体包被珠。然后把上一步获得的上清液 加入抗体包被珠中，4℃振摇过夜。离心弃上清，反复用细胞 对定量比较，所得结果如下(表略)：b、C、d、e四组样品 裂解液洗涤沉淀，最后吸弃上清，加入电泳上样缓冲液，重悬， 100℃煮沸4分钟，混匀后离心，取上清30(1电泳。 条带的总灰度分别为42、68、95、132。 三、结论 3．SD＆PAGE电泳：(1)聚胶：分离胶7．5％，积层胶2． 5％，胶厚1．5mm。(2)加样：样品30(1／孑L，蛋白质分子量 Markerl0(1矾。(3)电泳：在积层胶中以120V电压电泳，分 离胶中以300V电压电泳。 4．Western 化，与文献报道相符。并且检测的结果表明：hIL-5在HL-60 Blot(参考产品说明书)：半千式转移电泳， 。50mA转移0．5小时。用含5％BSA的TBST封闭膜，然后加 hIL广5的浓度呈剂量依赖关系。 入用封闭液稀释的STAT3抗体或pYSTAT3抗体，4C振荡 基金项目：本课题由四川省卫生厅资助(000183) 作者单位：610031成都，成都市第三人民医院检验科(李玲、张竣梅)；610041成都，四川大学华西医学中心基 础免疫教研室(张平、魏大鹏、章崇杰、蔡美英) 高效液相色谱法测定精浆辅酶Q10水平及其在不育症研究中的应用 李克商学军 陈爽李伟 用，并能增加机体的免疫力。COQlo同时也是机体内一种重 辅酶Q10(CoenzymeQlo，CoQlo)又称泛醌，是一种重要的 脂溶性物质，存在于以人类为主的高级动、植物线粒体的内膜 要的抗氧化物质，具有天然的抗自由基氧化，防止细胞膜脂质 中，在呼吸链中起