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第十节 赤潮异弯藻细胞稳定性及其毒性研究 269 第十节 赤潮异弯藻细胞稳定性及其毒性研究 一、引言 Hada是一种广泛分布于温带、亚热带近岸海域的常见 赤潮异弯藻Heterosigm口akashiwo 赤潮种类，是沿海和海水养殖水体中给鱼类和养殖贝类带来巨大危害的赤潮生物之…【1一～’1。 尽管有大量的研究工作报道了赤潮异弯藻赤潮发生的现场调查资料和实验研究，但对赤潮异 弯藻的毒性特征和致毒机理的了解仍然非常地缺乏，对其毒害物质的组成、特性及毒性机理研 究有待大量开展【4J。而使问题更加复杂的是世界各国所报道的赤潮异弯藻造成的危害并不 是都因为产生毒素的原因，有的地域的危害是因为产毒，而有的地域却没有有关毒素的报 道b1；董云林等对6个株系的赤潮异弯藻进行了LSUrDNA扩增及序列分析发现它们共有5 个变异点№J。赤潮异弯藻毒性的这些变异特性或许显示了赤潮异弯藻的地域性特征。 由于赤潮异弯藻维持自身渗透压的能力较弱，细胞在野外采样的常规固定液的作用下经 常会破裂而被漏检，给赤潮监测和预报造成困难，因此有必要针对其细胞稳定性的特点进行研 究，探讨其赤潮增殖过程中的细胞稳定性特征以利于赤潮监测与预报工作的进行。 本文所研究的赤潮异弯藻系2003年从浙江南田塘养蟹池造成养殖蟹大量死亡的水体中 分离纯化的赤潮异弯藻一个单种培养种株，有关浙江海域出现赤潮异弯藻的研究尚少见报道。 为了研究该种株的最适室内培养条件、细胞稳定性特点以及该种株的毒性特征，研究分析了室 内培养下的温度、盐度和光照强度这三个环境因子对其种群生长和细胞稳定性的影响；通过以 卤虫无节幼虫、黑鲷后期仔鱼和梭子蟹一期仔蟹为实验材料初步研究了赤潮异弯藻该品系的 毒性特征。 二、赤潮异弯藻室内培养的光温盐条件及细胞稳定性研究 (一)材料与方法 培养环境以GXZ型智能光照培养箱(宁波江南仪器厂)获得； 2000LUX； 温度设置：设置高、中、低三组，分别为27℃、20℃、10℃； 盐度设置：以盐度30的浙江沿海区海水为基准调节，加入海水精(上海保嘉生化技术有限 公司)获得较高盐度海水，加入蒸馏水获得较低盐度海水，梯度设置为：10、20、30、40、50，以盐 度计(S／Mill—E，日本ATAGO)测定所调节的各盐度梯度。 3X 实验各组：共2X 5=30组合，实验组别编号以光照、温度、盐度顺序，不设平行样。 接种初始条件：实验用250mL玻璃三危烧瓶，100mL3#加富培养液接种25mL对数生长 500～3 期的藻液(室温25℃，光照强度2 3#海水培养液为浙江省海洋生物工程重点实验室饶纯教藻培养液。有关赤潮异弯藻该晶系 270 第五章藻类养殖技术 的营养盐吸收特征将另文发表。 细胞记数与细胞相对稳定性测试：为了及时观察细胞相对稳定性变化，采用镜检记数方 法。每天定量取样用于记录生长密度的藻类细胞，经活体观察后以2％的甲醛海水溶液固定， 以血球记数板记数检测细胞密度，同时记录因固定液作用而破裂的细胞所占比例。固定液的 选择系经过测试多种固定液后细胞稳定性最好的一种。 整个实验操作严格按照微藻单种培养的消毒与操作规范。实验共9天，集中针对于该藻 的初期生长研究。 生长率的计算(适用全文)： 细胞生长率=(19N—lgNo)／(t—to) 式中，N。为to时的细胞密度，N为培养t时间后的细胞密度。 (二)实验结果 1．温度对赤潮异弯藻种群生长的影响 温度差异对赤潮异弯藻的生长有明显的作用，在高、低光照强度和不同的盐度条件下，低 温(10℃)环境中赤潮异弯藻的生长明显都比在较高温(20℃、27℃)环境中生长慢，而在20℃ 和27℃环境中生长趋势较为接近。但是27℃环境中赤潮异弯藻具有更高的生长率，在较短的 500～5 时期中会达到较高的密度。该藻生长曲线(光照强度4 0001x，盐度30)见图1。图2表 示了该组合各组中的生长