高加索三叶草、白三叶与其杂交后代F1+的RAPD+分析.pdfVIP

高加索三叶草、白三叶及其杂交后代F1 的RAPD 分析 1 1 * 2 * 1 陈丽丽 ，王明玖 ，何丽君 ，黄 帆 （1.内蒙古农业大学生态环境学院，呼和浩特，010019，chenlili0809@163.com； 2.内蒙古农业大学农学院，呼和浩特，010019 ） 摘 要：三叶草属（Trifolium L. ）植物属一年生或多年生草本，具有根系发达、固氮能力强、营养 丰富、适口性好及建植迅速等特点，被世界各地广泛地用作反刍动物的饲料和草坪地被植物。高加 索三叶草（T.ambiguum Bieb. ，2n=6x=48 ）是多年生长寿命草种，具有很强的抗寒和抗旱特性。近些 年来，国外大多数国家对该三叶草进行了一系列适应性和利用价值研究，认为高加索三叶草是唯一 可以在干旱、寒冷地区种植的三叶草品种。白三叶（T.repens L. ，2n=4x=32 ）是世界上利用广泛的优 良饲草，多年生、匍匐生长、主根短、侧根多，具有固氮能力强、耐阴、耐践踏及高观赏价值等特 点。高加索三叶草和白三叶都是三叶草属重要的种质资源。但是高加索三叶草固氮能力差，需要特 殊的根瘤菌，与三叶草属其它种的根瘤菌不能互接；而白三叶根系浅、喜湿，种植时或由于冬春季 节少雪而易受寒流侵害，或由于生长季地表干燥，而使其不定根难以发育，造成成片死亡现象，至 今不能推广应用。然而研究表明，高加索三叶草与白三叶具有相同的染色体基数（8 ），在遗传学上 是有亲缘关系的两个种。为了获得结合了高加索三叶草和白三叶的优点、克服了各自的不足的优良 种质资源，我们通过杂交胚离体培养技术获得了杂种F1 植株。进一步研究发现，杂种F1 体细胞染 色体的数目为40 条，是双亲染色体数目总和的一半，为五倍体（2n=5x=40 ）。RAPD 即随机扩增多 态性DNA （Random Amplified Polymorphic DNA ），是20 世纪90 年代初发展起来的一项分子标记技 术。它以聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR ）为基础，以随机排列的寡聚脱氧核昔 酸为引物（通常长度为 10 个碱基）对模板DNA 进行扩增，所产生的不连续产物经染色后即可鉴定 多态性。RAPD 标记技术以其模板用量少、引物无种属特异性、操作简单快捷等优点已被广泛用于 植物遗传多样性分析、种质资源评价、远缘杂种鉴定等方面。本试验拟对高加索三叶草、白三叶及 其杂种F1 进行RAPD 遗传差异性进行研究，从 50 个随机引物中筛选出 14 个适宜引物，共扩增出 181 个RAPD 位点，多态性位点百分率为74.0% ，每个引物扩增的条带数平均为3.8～4.8 ，DNA 片 段长度在 100～2000 bp 之间。研究发现，高加索三叶草与白三叶的遗传距离较远，为0.6337；杂种 F1 与父本白三叶的遗传距离为0.6535；而与母本高加索三叶草的遗传距离则相对较近，为0.4158， 说明杂种F1 更偏向其母本。该结果可为其杂交后代育性恢复、选育利用及种质资源评价提供依据。 关键词：草业科学；种质资源；高加索三叶草；白三叶；杂种F1 ；RAPD 172