禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的设计和构建.pdfVIP

禽传染性支气管炎病毒多表位 核酸疫苗的设计与构建 阳泰卜‘王红宁卜”汪雪2曾瑜红2张有峰2张鹏举1李玉玲1 (1．四川大学生命科学学院， 四川大学动物疾病防控生物工程研究中心， 四川成都610064； 2．四川农业大学动物医学院 四川雅安625014) 摘要：多表位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合，从而得到高 效的递呈；在细胞免疫方面具有独特的优势；可以有效应对病原微生物的变异和 免疫反应中的诸多不利因素，多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口，为了 探讨多表位核酸疫苗防治禽传染性支气管炎病(IB)的可能性，本研究以本实验 结构蛋白进行二级结构分析，抗原表位分析采用Kyte—Doolittle法分析氨基酸序 测各结构蛋白的抗原指数，综合分预测结果，有针对性的选择能获得最佳免疫保 护目的表位：采用S1糖基化B细胞表位保守序列E1和能有效产生保护性抗 体滴S2N端保守B细胞表位E2；以及能诱导CTL效应N核蛋白C端120残 基，表位之间连接采用“AAY”氨基酸序列以提高表位被切割的效率，并通过 Lasergene软件分析确保各表位之间独立和完整，将设计好多表位基因序列由上海 旭冠生物合成，经过酶切定向克隆pVAXl核酸疫苗载体。并将多表位基因克隆至 原核表达载体pGEX4T一1，经过IPTG诱导、超声破碎细胞、GST谷胱甘肽凝胶纯 化上清成功获得了多表位纯化蛋白，将多表位纯化蛋白包被ELISA板，用IBV阳 性多价血清检测其免疫原性，试验结果初步表明多表位纯化蛋白具有免疫原性， 能和多价血清发生交叉反应。综合以上结果，我们初步构建了禽传染性支气管炎 病毒多表位核酸疫苗，为研制高效、安全的IBV多表位核酸疫苗提供理论依据和 基础材料。 牛基金项目：国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AAl0A205) 宰·作者简介：阳泰(1981一)，男，博士研究生，主要从事微生物分子生物学研究 ···通讯作者：王红宁，博士，教授，博士生导师，主要从事预防兽医学、微生物分子生物学研 究，，E—mail．-whongning@163．tom 82