莲藕GBSS基因的克隆和表达的初步研究.pdfVIP

园艺学报2009，36(增刊)：2019 AetaHorticulturaeSinica 莲藕GBSS基因的克隆与表达的初步研究 李良俊，陆 叶，陈学好 (扬州大学水生蔬菜研究室，江苏扬州225009) 淀粉是莲藕(Nelumbonli啦ifgraGaertn)的主要贮藏物质，淀粉的组成直接影响莲藕的食用和加工 品质。直链淀粉含量高，莲藕品质相对较脆嫩；支链淀粉含量高，莲藕品质相对较糯，口感粉酥。颗 粒结合淀粉合成酶(GBSS)对直链淀粉合成起着重要调控作用。目前，国内外对莲藕的淀粉代谢及 淀粉特性等方面有少量研究，对调控莲藕淀粉合成的基因的研究少见报道。因此，作者研究了莲藕 GBSS基因的序列及结构，初步探讨该基因在莲藕膨大期的表达，以期为莲藕淀粉品质育种提供 参考。 试验材料为主栽品种‘美人红’和‘鄂莲4号’。采用改良CTAB法提取幼叶总RNA和基因组 DNA。根据GenBank中已发表的其他植物的GBSScDNA序列设计57和37端特异性RACE引物，利用 特异性引物，以‘美人红’基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增得到莲藕GBSS基因转录区基因 Green 组序列。最后通过SYBR I染料实时PCR，以基因届一actin为内参，采用相对定量方法，数字化 表示在莲藕膨大期‘美人红’和‘鄂莲4号’植株不同部位GBSS基因的表达差异。引物合成和基因 测序由上海生工生物工程有限公司完成。 265 克隆和测序得到莲藕GBSS基因的cDNA序列全长为2 848 放阅读框(ORF)长为1 64．2％、50．6％。莲藕GBSS基因编码的氨基酸序列与金鱼草的同源性最高，达到77％，与马铃薯、 甘薯的同源性达到75％，与豆科植物的同源性在70％一75％之间，与禾本科植物的同源性介于 65％～70％之问。 152 克隆得到莲藕GBSS基因组转录区全长为4 子和12个内含子构成。外显子在65—358 在GT和AG重复序列，符合“GT—AG”剪切规律。 在莲藕膨大期，‘美人红’叶片中GBSS基因的相对表达量最高，是地下茎中表达量的5倍多， 花和叶柄中的表达量最少。‘鄂莲4号’叶柄中GBSS基冈的相对表达量最高，约为地下茎和花中表 达量的2倍，叶片中表达量最低。‘美人红’地下茎中该基因的表达量比‘鄂莲4号’地下茎中高。 而‘美人红’成熟地下茎的直链淀粉含量明显高于‘鄂莲4号’，分子水平与生理水平上的研究结果 一致。 关键词：莲藕；淀粉；基因；克隆；表达 中图分类号：S645 文献标识码：h 文章编号：0513-353X(2009)S-2019-01 收稿日期：2009一08一lO