三种淡水鱼脑乙酰胆碱酯酶(ACHE)的提纯与比较性研究.pdfVIP

应用·残留 第二届农药交流会论文集 三种淡水鱼脑乙酰胆碱酯酶(ACHE)的 提纯和比较性研究 谢显传‘(*通讯作者)李少南谭亚军 (浙江大学农药环境毒理研究所，浙江杭州310029 穗鱼(Pseudorasbora attratus)、虹鳟(Salmo parva)、苹金鱼(Carassius gairdneri)这三种淡水鱼脑乙酰胆碱 酯酶(ACHE)，然后比较这些不同种类的鱼脑ACHE的纯酶液与粗酶液的动力学特性和抗抑制性， 分析这些鱼脑ACHE性质在种类间的差异及其与ACHE活性差异的关系以及对抑制剂的敏感性差 异。研究结果表明，这三种鱼脑ACHE性质在种属间的差异要远远小于其粗酶液在比活性上的差 异，从而得出ACHE性质差异并非影响不同鱼脑ACHE活性差异的主要因素的结论；这三种鱼脑 纯酶液。 关键词乙酰胆碱酯酶，ACHE，提纯，马拉氧磷，三唑磷，动力学 有机氯农药禁用后，有机磷和氨基甲酸酯类农药成为农业生产上控制农业病虫害的主要农药。 有机磷和氨基甲酸酯类农药的广泛使用造成它们大量地进入到河流、湖泊、海洋等各种水体，造成 水体的农药污染。 在以往的研究发现有机磷和氨基甲酸酯类农药是水环境中鱼类乙酰胆碱酯酶(ACHE)的主要 抑制剂，人们常利用鱼脑ACHE作为水体有机磷和氨基甲酸醣类农药污染的生物提示器，以鱼脑 ACHE受抑制程度来指示水体有机磷和氨基甲酸酯类农药污染情况…【2J。G．M．Chuiko在调查中发 Perca fluviatilis)比白鲑鱼 现不同种类的鱼脑ACHE活性差异很大，如河鲈脑ACHE活性(perch (whitefish albul8)商出近七倍Hj。即使是同一种类的鱼脑ACHE也有着很大的个体差异， Coregonus 因为不仅一些非生物因素(如水温、盐度和食料充足与否)可能会影响龟脑ACHE活性【4J，而且鱼本 身的生理学因素(性别、年龄和体长)也可能影响其活性J，另外同一个体不同组织的ACHE活性也 是相差很大的【6J。正是因为不同鱼脑ACHE活性变化差异性大，使得不同实验所得的数据可比性 不强，不能相互作为有用的参考，即使在同一个实验，因为样本个体差异大，对照和处理不能有很好 的可比性。为什么在种类和个体间鱼脑ACHE活性差异这么大?AhmedD．Khattab等认为朱提纯 的ACHE粗酶液活性差异取决于两个因素：一个是ACHE在脑组织的密度即单位重量蛋白质里 ACHE的数量的差异，另一个就是酶本身的性质差异17J。但是造成不同种类的鱼脑ACHE活性差 异是哪个因素起主要作用?或者两个因素同时起作用? 本实验先分离提纯出三种淡水鱼脑ACHE，然后(1)比较不同种类鱼脑ACHE的纯酶液与粗酶 液的动力学特性，分析不同种类鱼脑ACHE性质差异，进而推论不同种类鱼脑ACHE性质差异对鱼 脑ACHE活性种类问差异的影响。(2)比较不同种类鱼脑ACHE的纯酶液和粗酶液抗抑制性，分析 鱼脑ACHE纯酶液与粗酶液对抑制剂的敏感性差异。 l方法和材料 1．1实验动物：本实验选用三种鱼：麦穗鱼Pseudorasbom ·312· 第二届农药交流会论文集 应用·残留 德市虹鳟鱼养殖场提供。 o DEAE—Sephadex LpH7，0这8个不同盐浓度缓冲液梯度洗脱，收集有酶活性的洗脱液。 透析袋在25nmaol／LIris—hcl一0．15mol／LNael pH7．4缓冲液透析过夜，然后用聚乙二醇(PEG)20000 Trls—I／el一0．15mol／LNael 浓缩至一定体积，上25mmol／L pH7．4缓冲液平衡的S,,ohad即【G一200柱 (1．0cm×30cm)，平衡液洗脱，流速2～3ml／h。