沉积物二恶英免疫检测应用的研究.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 沉积物二恶英免疫检测应用研究 李康，殷浩文’，戎志毅，贾丽娟 1．引言 二嗯英类化合物的生物检测方法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便，成本相对低的优点。 联并没有建立，但是作为筛选工具日益被接受。以免疫酶反应(EIA)为基础建立的美国环保局方 method 法(uSEPA4025)，具有免细胞培养等优点，检测更为便捷。与化学仪器分析方法一样，生 物检测方法的稳定性也受到样品来源以及前处理方法的影响。本研究采用已有商用检测试剂盒，对 免疫检测方法应用于河流沉积物样品进行了尝试，以期将该方法应用于大规模样品筛选。 2．材料和方法 2．1材料 所用有机试剂均为试剂级或农残级。己烷、丙酮、甲醇和甲苯购自Fluka公司，无水硫酸钠购 Kits购自CAPE 自Sigma公司。EIA Technologies公司。 微量移液器，HACH酶标仪。 实验中所用沉积物样品采自上海市内河流。用多功能沉积物采样器取表层沉积物，采样管现场 密封后保持垂直运回实验室。 2．2方法 样品前处理：将新鲜沉积物样品剔除石块、树枝等杂物，然后放入衬有锡箔的冻干机样品盘， 冷冻干燥约48小时，干燥样品上震筛机过60目筛网，收集过筛样品。 样品纯化及分析：操作基本按照EIAKits所附说明书进行。方法简要描述如下：采用震荡萃取 法，萃取剂为己烷：丙酮(1：1)。在含有待测物的萃取液加入适量有机留存液，用氮吹仪除去萃取 剂。样品净化采用硅胶柱与碳柱相联的双柱层析法，吸附于碳柱的待测物最终经甲苯洗脱下来，收 集甲苯溶液。含有待测物的甲苯溶液加入适量水溶性留存液，用氮吹仪除去甲苯待测。样品检测采 用酶联免疫检测方法。样品中待测物含量由标准曲线计算得出。 质量控制：空白样品、加标空白样品及加标样品与样品同时测定，程序相同。标准曲线满足质 量控制标准。 分析数据。 3．结果及讨论 3．1方法的稳定性 在15个月中，共进行了14次测试。标准曲线表现出较好的可重复性，总变异系数为15％(表 1)，与在其它实验室共进行的41次测试的变异系数(14％)相似。 13l 持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 表1．EIA标准曲线的重复性。 3．2方法的特异性 方法的检测下限定义为OD值为阴性对照85％对应的含量，高于检测下限OD值即认为是阴性结 果。各处理阶段空白样品的检测值显示，检测方法存在假阳性的概率很低，在13个样品中，仅有一 个出现假阳性。而在15个月的11次测试中，也仅有1次方法空白出现了假阳性。由于甲苯能干扰抗 原抗体的反应过程，调整氮吹时间可以彻底除去甲苯，进而消除假阳性。 3．3方法的灵敏度、平行样品精度、加标回收率 本检测方法的检测下限为3．4士1．4 1．4 dw)，与在其它实验室共进行的41次测试的检测下限(3．9士1．4 pg／g pg／管)接近。对4个不同的 样品进行检测发现，单个样品批内变异系数分布在3．79％之间，总的批内差异为30％(n=17)。对同 标回收率为147士64％(士SD)(n=5)，变异系数为44％。 3．4结果比对 其中含量较低的2个样品低于EIA方法的检测下限，被判断为阴性，而含量高于5．1 WHO—TEQ Pg／g 的其它样品都可以由EIA方法检出，结果表明EIA方法可以作为定性筛选的工具。 此外，利用同一批样品，还对HRGC．HRMS方法与EIA方法进行了比较，结果显示无论是 方法与HRGC．HRMS方法具有良好的相关性，对于那些来源相同或相似的样品，可以利用 EIA-TEQ值的相关因子，完全有可能利用EIA方法对大量样品进行定量研究。 图1．不同TEQ沉积物样品HRGC-HRMS方法与EIA方