除草剂2%2c4-滴丙酸和脂肪酶作用的对映体差异的研究.pdfVIP

第四届全国环境化学学术大会论文集(下册) 除草剂2，4一滴丙酸与脂肪酶作用的对映体差异研究 袁玉丽，沈忱思，文岳中 环境科学研究所，浙江大学环境与资源学院．杭州，310029 摘要 应用紫外差光谱法和荧光光谱法研究了水溶液中手性苯氧丙酸类除草剂2，4-滴丙酸与青霉扩展菌 碱性脂肪酶之间的对映体作用差异。结果表明，2，4一滴丙酸与脂肪酶之间的作用具有手性选择，R-DCPP与 脂肪酶的结合作用最强。 关键词 2，4-滴丙酸(2，4-DCPP)；青霉扩展菌碱性脂肪酶；紫外差光谱：荧光光谱；手性选择 0引言 2一(2，4一二氯苯氧基)丙酸(2，4-DCPP)属于手性苯氧丙酸类除草剂，通过抑制叶绿体 中的乙酰辅酶羧化酶而呈现除草效果…．脂肪酶(EC3．1．1．3)是催化脂类分解生成甘油和 脂肪酸的一类水解酶。手性农药进入生态环境后，被生物体摄取，其各个对映体在体内的活 性，代谢等一系列涉及生命活动的过程往往都存在对映体选择性【2。。因此在对映体水平上研 究手性污染物的环境闯题才能弄清它们在环境中的行为和效应。目前在手性农药与生物体 相互作用的对映体差异方面进行了大量工作，但从酶与手性农药的相互作用等分子 层面上进行探讨的研究报道还比较少。因此，本文选择了手性苯氧丙酸类除草剂2，4一 滴丙酸和脂肪酶作为研究对象，研究了DCPP与脂肪酶作用的对映体差异，为研究手性 农药的环境行为和手性污染的修复提供了酶学上的参考数据。。 1材料与方法 脂肪酶由0．05 tool·L以pH=8．oo磷酸盐缓冲溶液配制而成。本实验采用一系列2，4一滴 丙酸浓度梯度变化而脂肪酶浓度不变的溶液进行测定。紫外差光皮测定时以相应浓度2，4一 滴丙酸溶液作为参比溶液扫描差光谱，狭缝宽度为1．Onm，比色皿光径Icm，实验室温度为 25C。荧光光谱法激发和发射狭缝宽度为lOnm，扫描速度1500nm／min，Xe灯光源，固定激 发波长280nm，实验室温度选择25C和35C。实验均设置三组平行。 2结果与讨论 2．1除草剂对脂肪酶的紫外差光谱影响差异 蛋白质的紫外吸收主要是由于芳香族氨基酸色氨酸、酪氨酸的电子激发引起的。这些生 色团的吸收光谱受溶液条件的变化而产生变化。脂肪酶吸收峰位于204rim，吸收强度为 O．5514。一般认为230nm以下的酶紫外光谱可以反映酶蛋自主链构象的变化¨1． 随着除草剂浓度的增加(O一160pmol·L以)，脂肪酶的吸收强度均发生了有规律的下降，同 时均产生了红移现象。说明除草剂的加入使脂肪酶的活性部位构象产生了变化，两者可能发 生了结合作用H1，并且这种结合作用表现出了一定的手性选择，R-DCPP对脂肪酶的紫外吸收 光谱影响最大。初步说明了DCPP与脂肪酶之间的结合作用存在手性选择，R型对脂肪酶的抑 制作用最强。 2．2除草剂与脂肪酶的结合常数及结合位点数比较 引起荧光猝灭的原因有动态和静态猝灭之分。由Stern-Volmer方程归1求出的DCPP对脂 肪酶猝灭过程的Kq远大于最大扩散碰撞猝灭常数2×10“L／(mol·S)埔’，可知该猝灭过程是静 732 第四届全国环境化学学术大会论文集(下册) 态猝灭。对于静态猝灭强度和猝灭剂的关系可由荧光一猝灭剂分子间的结合常数表达式导出 Ⅲ。以埘(Fo．F)／F】对l烈Q】作线性拟合，即可通过斜率和外推直线的截距求出除草剂分子与酶 子的结合常数K和结合点数rl，并可计算出其热力学参数，结果见表1。 表1 除草剂与脂肪酶作用的结合常数和结合位点数及热力学参数 结合位 温度 结合常数 相关系数 自由能 焓变 熵变 除草剂 点数 T(K) KfL／t001) R △G △H ． △S n R．DCPP3．30xloj1．0825 0．9988 ．2958．03 2948．42 19．82 298 S．DCPP1．54x1oj 1．0047 O．9956 ．1069．77 43127．39 148．3l