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猪传染病
PCR检测基因枪轰击和肌肉注射不同剂量PRRSV
， ．ORF5基因疫苗在BALB／c小鼠体内分布规律研究
豆文波1～，程安春1·p，汪铭书1～，希尼尼根1～，陈希文1～，刘菲1，陈孝跃1t2刘芳1·2
(1．四川农业大学动物科技学院，四川雅安625014；2．动物疾病与人类健康四川省重点实验室，四川
雅安625014；3．内蒙古农业大学动物科学与动物医学学院，内蒙古呼和浩特010018)
因枪轰击以及20099、100pg+lOOpg
后不同时间分别取各组BALB／c小鼠胃、肠、肝、脾、肾、心、肺、免疫部位肌肉和脑等组织器官。通过
小鼠的胃、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏、免疫部位肌肉和脑中均检测到PRRSVORF5基因疫苗；于免疫
后120天在6pg基因枪轰击组BALB／c小鼠免疫部位肌肉中检测到PRRSVORF5基因疫苗；于免疫后150d
在20099、100肛g+lOOgg
能延长ORF5基因疫苗存留时间。
关键词：PRRSV基囚疫苗；基因枪轰击；肌肉注射；分布；BALB／C小鼠；剂量；
vaccine)又称DNA疫苗(DNAvaccine)，就是将编码某种蛋白抗原的基因连接到真
基因疫苗(gene
核重组表达载体上，通过基因枪轰击或肌肉注射等方法将基因疫苗导入到动物机体中，在宿主细胞中表达
外源基因，诱导特异性体液免疫应答和主要组织相容性复合物(MHC)I和II类限制性细胞免疫应答，2达
达产物可诱导免疫反应，由于基因疫苗具有与天然抗原相同的构象和免疫原性、可诱发产生保护性中利抗
体和良好的细胞免疫、而且具有制作简单和价格低廉等优点，基因疫苗的研制与开发成为生物技术领域的
研究热点。本实验通过基因枪轰击和肌肉注射不同剂量BALB／c小鼠，通过PCR检测不同时间基因疫苗在
各组BALB／c小鼠体内的分布情况，为阐明PRRS基冈疫苗的免疫机理提供实验素材。结果报告如下：
1材料和方法
1．1实验动物纯系3周龄雌性BALB／e小鼠，体重18．22克(购自于四川大学实验动物中心)。
SC2株ORF5基
研制。
1．3主要试剂 bufier、25mmol／L
IU仙l DNA聚合酶、10xPCR dNTP为博瑞克公司
Taq MgCl2、10mmol／L
产品。
1．4动物免疫及样品采集140只雌性BALB／c小鼠随机分为7组：(1)6lag
枪轰击组20只；(2)200pg
pcDNA．PRRSV-SC2-ORF5+100pgpcDNA．IL．2肌肉注射组20只：(4)lOOgg
肉注射组20只：(5)5099 pcDNA3．1(+)质粒
各取两只BALB／c小鼠的胃、肠、肝脏、脾脏、肾脏、心肌、肺脏、脑和免疫部位肌肉。样品分别放入灭
菌EP管中，．20℃保存备用。
Nacl、
238
． 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
5min：
5min；(4)取
上清，加入400ul氯仿／异戊醇(24：1)震荡混匀4．0 5mira(5)取上清，加入2．5倍体积冻
12000rpm／min
5min。弃上清，将EP管小心的倒扣于滤纸上片刻，放入DNA浓缩干燥
无水乙醇，混匀，4℃12000rpm／min
‘
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