PCR在单纯疱疹病毒分型的临床意义.pdfVIP

也可出现克隆性淋巴细胞群(如银屑病)，少量良性淋巴细胞亚群可以PCR选择性扩增，出现假阳性克 隆性结果。 or 3．谱系失真或紊乱(1ineageinfidelitylineage 双阳性。 4．部分淋巴瘤基因重排检测为阴性，即假阴性(国际上基于PcR的假阴性可高达30％～40％)， 原因可能为；(1)基因重排检测的金标准是Southernblot(但其需要新鲜组织多，且耗时，有射线 污染)，我们建立的是基于PCR基础上的重排检测，由于个体差异，设计引物的吻合度无法达到100％， 因此必然导致阳性率下降；(2)体细胞的DNA突变；(3)重链的丢失或部分重排。 五、淋巴组织基因重排检测的意义 1． 为病理医师在取材有限、组织太小(如穿刺)的情况下提供一个重要的诊断参考指标。 2．淋巴血系统的疑难病例在会诊中诊断意见差异大，该检测可提供分子的克隆性指标。 3．为早期或不典型病例提供一些诊断思路。 4．为组织学诊断标准不够，但临床症状、体征和病情发展符合淋巴瘤的患者提供试治疗的依据。 5．提供一个科研的手段：研究淋巴组织的多克隆一寡克隆一单克隆过程与淋巴瘤发展过程的相关 性，以及非肿瘤性克隆性淋巴细胞群在疾病中的意义等。 PCR在单纯疱疹病毒分型的临床意义 鄂文-刘叔平·郑杰t王振清： 1北京大学医学部病理系， 北京 100083 2海淀妇幼保健院， 北京 100080 疱疹病毒是一组中等大小有包膜的DNA病毒，此类病毒主要侵犯外胚层来源的组织，包括皮肤、 B 黏膜和神经组织，分为Q Y三个亚型，其中与人类感染有关的主要有HSVl、HSV2，水痘．带状疱 出现水疱和溃疡，眼睛表现为树枝状角膜炎。本文主要探讨PCR方法检测外生殖器疱疹溃疡皮损处或者 分泌物中是否含有HSvl．DNA、HSv2一DNA，结合临床表现以及其他实验室指标，为临床明确病因， 提供依据。 一、材料和方法 1． 材料：某妇产医院皮科门诊诊断性传播疾病病例42例，最大年龄58岁，最小年龄19岁， 其中男性3名，女性39名。 2．本采集和处理：采用无菌棉拭子取患者破溃液或者分泌物，浸泡于含有1ml生理盐水的无菌 nll的离心管中， 试管中，尽量将脱落细胞溶于液体中，并且尽量贴管壁挤压。将上述液体全部转移到1．5 2000 min，弃上清，将沉淀尽量保留在管底。晾干后加入100ml三蒸水，．20℃冰箱保 rpm，离心5 存。 二、方法 m1，其中20 5 mmoV 将预先配制好的DNA消化液16．25 m，20％SDS6．25山，100 II叫IIll的蛋白酶K L1Ms mmo儿EDlA 2．5“l，50 2．5“l，混合加入处理好的样本管中，用三蒸水补足体系到250山，放 h。 置于56℃恒温器至少l 消化好的样本，常规的酚、氯仿、异戊醇(25：24：1)抽提一次，氯仿、异戊醇抽提一次， 000 min，弃上清，晾干，并用100 无水乙醇沉淀过夜。13 rmp，4℃低温离心15 pl三蒸水溶解。 s， 55℃40s，72℃40s，共 取10微升进行PCR扩增，扩增条件：95℃2min预变性，94℃40 32个循环，最后72℃延长7 紫外灯下观察结果。 min。取lO¨l产物进行琼脂糖凝胶电泳， 三、结果 重感染。