热激条件下拟南芥Athspr突变体叶片蛋白的表达分析.pdfVIP

生物物理学报 第二十四卷 第五期 二Oo八年十月 ACTA BIOPHYSICA SINICA VO1．24 No．5 Oct．2008 热激条件下拟南芥Athspr突变体叶片蛋白的表达分析 胡 拮， 吴庆丰， 李 萍， 孙英莉， 许声涛， 王新宇， 王崇英 兰州大学生命科学学院细胞生物学研究所，兰州I730000 摘要：以拟南芥野生型和突变体Athspr为材料，采用双向电泳技术对其在0h 对照 、2h及8h热激条件 下的叶片全蛋白进行了分离。应用 ImageMaster软件从以上蛋白电泳图谱中分别鉴定出lO00多个蛋白点，发现其 蛋白表达谱在野生型和突变体中存在明显差异。同时选取在野生型和突变体中表达明显有差异的3个高丰度蛋白 质点进行了质谱鉴定，并进一步通过GPS．MASCOT进行了数据库检索，鉴定出这三个蛋白质组分分别为富含甘 氨酸的RNA结合蛋白7、细胞色素b6．f复合物铁硫亚单位及放氧增强蛋白1-2。以上3个蛋白均与植株在胁迫条 件下的抗性有关。推测由于T—DNA 的插入使得突变体 中Athspr基因的功能受到 了影响，进而影响了其下游其他 基因的表达和上述3种蛋白的表达与功能，产生了突变体的耐热能力以及其他逆境条件下抗逆性下降的一系列表 型改变。 关键词：拟南芥；Athspr突变体；热激；双向电泳；质谱分析 中图分类号：Q942．6 0 引 言 策略在有害的高温条件下存活：一类热激蛋 白 fheatshockproteins，HSPs1作为分子伴侣防止蛋 蛋 白质组学 以蛋 白质组为研究对象，从整体蛋 白变性和聚合，其它的HSPsf包括泛素和特定的 白质水平上，在一个更加深入、更加贴近生命本质 蛋 白激酶 负责非天然蛋 白的降解。热激反应本质 的层次上探索和发现生命活动的规律和重要生理、 上是瞬时的，在热激处理 35min后就可以检测到 病理 现象 。蛋 白质 双 向电泳 two．dimensional 热激蛋 白mRNA量的增加及新合成的热激蛋 白的 elecrophoresis， 2-DE 、 生 物 质 谱 mass 出现，并且在开始 1到2小时后达到最高峰。 spectrometry，MS 和生物信息学 bioinformatics 本实验室利用 T—DNA 插入诱变技术获得了 是蛋白质组学的三种最重要的核心技术[1]。蛋 白质 600多个拟南芥启动子诱捕 系 promotertrap 组学有两种研究策略。一种是高通量研究技术，将 lines ，分离到一个多效突变体，其最显著的特征 生物体 内所有的蛋白质作为对象进行研究，并建立 是生长发育迟缓、营养生长阶段延长、叶片等器官 蛋白质数据库，从大规模、系统性的角度来看待蛋 体积减小 、植株矮化 、抗逆性降低 。我们用 白质组学，这样更符合蛋 白质组学的本质。另一种 TAIL—PCR对突变体的相关基因进行了克隆，通过 策略是研究不同状态或不同时期细胞或组织蛋白质 核苷酸序列比对分析发现，该基因为热激蛋白相关 组成的变化，主要 目标是研究差异蛋 白质及其功 基因，命名为Athsprfheatshockprotein．relatedin 能，如不同生理状态下植物的差异蛋 白质，研究差 AraDidopsisthaliana 。随后，我们对该突变体进行 异蛋 白质及其编码基因的功能2【J。 了遗传学分析，突变体与野生型的杂交子一代表现 实验条件下的热激反应为基因翻译和翻译后水 为野生型，而F群体中野生型性状和突变体性状 平的研究提供了诸多有用的信息。植物体暴露在高 的植株分离比例为3：1，说明该突变体为隐性单 温条件下将引起基因表达迅速而剧烈的变化，包括 正在进行的基因转录的终止和新基因转录的起始， 收稿 日期：2007—10．18 以及一些正常 mRNAs的翻译减少 。通常的情况 基金项 目：国家 自然科学基金 座机电话号码 和国家基础科学人才 是，大多数基因关闭或者减弱，并且一些称作热激 培养基金 J0630644 heatshock，HS 的特异基因，被迅速诱导到一 通讯作者：王崇英，电话： 0931 座机电话号码，传真： 0931 座机电话号码， 个高水平_314]。HS基因编码的蛋 白使细胞通过两种 E—mail：wangcy@lzu．edu．cn 362 生 物 物 理 学 报 2008盆 基因突变体[51。当在 30~C轻微热胁迫下培养时，发 并进行蛋 白质定量，再与水化液 f8mol／L尿素， 现野生型生长速度缓慢，营养生长阶段向生殖生长 2％CHAPS，0．5％TritonX．100，O．002％溴酚蓝， 阶段转变较正常条件培养下延迟40天左右，而突 0．5％ I王，G 缓冲液