酸适应对一株乳酸乳球菌膜脂肪酸组成和膜蛋白表达的影响.pdfVIP

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(11)：1459-1465；4November2008 ISSN0001—6209；CN11-1995／Q http：／／journals．im．ac．ca 酸适应对一株乳酸乳球菌膜脂肪酸组成和膜蛋白表达的影响 刘怀龙，盂祥辰 (东北农业大学， 乳品科学教育部重点实验室， 食品学院，哈尔滨 150030) 、 摘要：【目的】筛选具有较强酸适应能力的菌株，研究酸适应对其膜脂肪酸组成和膜蛋白表达的影响。 【方法】从 20株菌中筛选出一株具有较强酸适应能力的乳酸乳球菌 KLDS4．0312，以GC．MS法测 定该菌酸适应前后膜脂肪酸组成变化；对酸适应前后该菌膜蛋 白的差异表达进行双向电泳分析。 【结果】酸适应后 ，该菌膜不饱和脂肪酸含量从 30．77％上升到 42．93％，饱和脂肪酸含量从 69．23％ 下降到 57．07％，且有一种新的长链单不饱和脂肪酸 C19：1-n6被诱导产生。酸适应过程中至少有 65 个蛋白质点表达出现显著差异，其中上调的蛋白质点有 43个，减弱表达的蛋白质点有 22个。而添 加氯霉素后，菌株的酸适应能力消除，可能与氯霉素抑制新蛋白的合成有关。 【结论 】说明细胞膜 脂肪酸组成的适应性改变和应激蛋 白的诱导产生是该菌主要的酸适应机制。 关键词：酸适应 ；乳酸乳球菌；脂肪酸；应激蛋 白；存活率 中图分类号：Q931 文献标识码 ：A 文章编号：0001—6209(2008)11—1459．07 当前各种益生菌制剂大量涌现，市场前景广阔。 脱羧酶活性、细胞膜脂肪酸组成和应激蛋白表达等发 然而 ，益生菌本身发酵产生的乳酸、乙酸以及过胃时 生相应变化[1，提高了益生菌的酸耐受力。 的胃酸等酸胁迫 (acidstress)均会明显降低制剂的活 因此，研究益生菌的酸适应机制，并采取相应方 菌数。如LactobacilluscaseiASCC1520等 5株乳杆 法来提高益生菌的酸耐受力，成为一种新思路。这对 菌在pH2．0环境中作用 2h后，活菌数从 10 cfu／mL 于解决 目前益生菌制剂过 胃时存活率普遍偏低 的现 下降到 10 cfu／mL…；LactobacillusplantarumST一Ⅲ 象具有重要意义。另外，一些乳酸菌常用作发酵剂， 等3株乳杆菌在 pH 1．5的人工 胃液中作用 2．5h，均 如能找到提高其酸胁迫抗性的途径，实现普通生产条 不能存活l2】。因而，提高益生菌的酸耐受力是 目前益 件下浓缩发酵剂的生产和 “细胞工厂”的高密度培养， 生菌制品研制与开发的技术关键。提高益生菌酸耐受 将会极大推动这些微生物在工业生产中的应用。本试验 力的主要方法包括 】：筛选耐酸菌株、添加还原剂或 从 20株菌株中筛选出一株具有较强酸适应能力 (acid 抗氧化剂 、微胶囊技术、双层包埋技术、基因融合技 adaptivecapacity)的菌株，并研究酸适应对该菌膜脂肪 术等，但这些方法本身在安全、实用性上还存有不足之 酸组成和膜蛋白表达的影响，以探讨该菌酸适应机制， 处。而研究证明，Propionibacterium#reudenreichii[、 为最终提高菌株的酸耐受力提供一定的理论参考。 LactobacillusacidophilusJ、Bifidobacterium[6]等益生菌 可通过酸适应 (acidadaptation)提高其酸胁迫抗性。 1 材料和方法 酸适应过程中引发了酸应激反应 (acidtolerancere． 1．1 材料 sponse，ATR)，菌体质膜 FlFo—ATPase活性 、谷氨酸 1．1．1 菌种和培养基：婴儿双歧杆菌：KLDS2．0602、 基金项目：国家 “863计划”(2006AAlO2344)；东北农业大学创新 团队项 目 通讯作者。Tel：+86-451E-mail：xchmeng@163．c