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微生物制剂检测规程 广州金水动物保健品有限公司 2010.11.6 微生物检测实验室的要求 1．检测区 微生物实验室的区域要求做如下的特定操作：接收、贮存、制备和样品处理；培养基和设备的制备和灭菌；分析操作：称重、稀释、接种、传代、培养、菌株的保存等；设备的去污与清洁、分析废弃物的处理。 2.检测试验室的位置 微生物分析的环境不应影响分析的可靠性。 谨慎选取检测试验室的位置，避免交叉污染的危险。 注意避免极端环境如高温、灰尘、潮湿、水蒸汽、噪音、振动或直接被阳光曝晒等。 检测区应足够大，以保持工作区域干净整齐。在整个检测实验室房舍区内，建议每个检测人员的人均工作平面面积约为20m2。 在检测期间，只有操作人员才能进入检测区。 以下工作应设立单独的房间、区域和/或特定区： 样品的接收和贮存； 样品的制备，尤其是原始材料（如含大量微生物的粉状制品）； 培养基和玻璃仪器的制备、准备与灭菌； 玻璃器皿和其它器材的清洗以及器材污染的清除和已经污染的培养基的处置； 食品无菌状态的检查。 对以下区域也应考虑隔离： 培养基制备区和培养基、器材的灭菌间； 污染净化区和洗涤区。 培养箱、冰箱和冷冻柜可专门放于合适的房间。 3.无菌间和洁净装置 接种、移种等无菌操作在无菌室或洁净装置内进行。实际上，无菌室或洁净装置并不是绝对无菌，只是要求空气达到一定的洁净程度。空气洁净程度用洁净度等级来衡量，空气中的尘埃粒子数则用尘埃粒子计数器测量。无菌操作应在达到100级的空气中进行。 无菌室的洁净程度有时也可用菌落数来评价，通常是将无菌平板开盖暴露20-30 min，经培养后，如平板上菌落数少于3个即合格。 无菌室空间不宜太大，一般为4-6m2，高约2-2.5 m。为了减少外界空气的干扰，要设1-2个缓冲间，无菌室一般用拉门和固定双层玻璃窗。墙面、地坪和天花板的表面应光滑、无裂缝。墙角砌成圆弧形，地坪有1/500坡度。室内的固定设备应昼尽量简单，工作台最好嵌在墙上，管道、电线等设施则以铺设暗线为佳。 无菌室通常用36英寸30W紫外灯灭菌（新灯波长2300-2540A），使用前照射30 min。一般，一支紫外灯能用2500 h，喷洒或揩擦用的化学灭菌剂包括：0.25-0.5%新洁尔灭，0.5%过氧乙酸，75%酒精，0.5-1%漂白粉等。必要时，可用甲醛（每米3空间用10-15 mL甲醛和5 g高锰酸钾）薰蒸12-24 h。 完善的无菌室应具备空气调节系统，引入净化空气以维持室温22-25℃和70%左右的相对湿度.室内保持24.5-73.5 Pa的正压，换气次数为5-12次/h。 洁净装置最初用于预防放射性尘埃，后来则在电子、计算机、医药和微生物工程等领域得到广泛的应用，它的工作原理是使空气经过高效过滤器的过滤而得以净化，并因呈单向、平行、均匀地流动的层流状态而达到洁净工作区的目的，常用流速为0.2-0.8 m/s。 洁净装置按其结构可分为洁净工作室和洁净工作台两类，按照空气在工作区内的流动方向，则可分为垂直式和水平式两类。 洁净工作台主要由箱体，空气过滤器、风机、工作区、配电箱和照明灯具等构成，空气过滤器有两级或三级之分。初效和中效过滤器常用一定孔径的聚氨酯泡沫塑料和涤纶-晴纶无纺布材料为过滤介质，常规使用3个月左右就最好清洗一次过滤介质，以减轻高效过滤器的负担，高效过滤器的常用过滤介质为超细玻璃纤维纸或其他微孔滤膜。 一般，洁净工作台放置在环境清洁的实验室中使用即可；如无菌要求很高时，可考虑将洁净工作台放入无菌室内。操作时，应尽量避免明显扰乱工作区气流的动作。 4.室内设施 （1）为减少被灰尘和微生物污染的可能性，检测室应配备以下设施： 实验室用的墙、天花板和地板应是平滑、易清洗、耐清洁剂和消毒剂的腐蚀； 楼顶上的输液管道不能穿过房屋，除非被密封起来； 如果没有特殊原因，窗户外面应装有日光辐射防护系统； 门窗应能密合关闭，以免检测时受气流影响；而且，其设计应使它们避免形成吸尘死角，且便于清洁。 （2）环境温度和空气质量（微生物含量、湿度、尘埃分布等级等）应适合进行检测的要求。为此，建议在空气入口安装通风过滤系统。 当在低污染气氛下进行检测时，房间应专门装有一个层流式超净工作台或（和）一个安全的工作台。 （3）实验室台面和桌柜应用平滑、无渗透的材料制成，以便于清洁和消毒。如果可能，橱柜应达至天花板，以防灰尘堆积。 实验室内桌柜的设计应便于地板的清洗（如用可移动桌柜）。 应有封闭的贮存设施，对样品、培养基和试剂等的操作文件进行保存。 注意：不常用的文件或书应放在检测区外。 （4）房屋应有很好的照明设施，避免反射光干扰。应尽可能地避免工作区和敏感的仪器设备（特别是培养箱）直接曝露在阳光下。 5、维护和检查 地板、墙壁、天花板、实验室里的台面和桌柜定期维修，不能有裂