米曲霉谷氨酰胺合成酶基因（AoglnAI）在大肠杆菌中的表达和酶学特性研究.pdfVIP

上海农业学报 2015，31(1)：17—22 ActaAgricuhuraeShanghai DOI：10 ． 15955~．issn100001．04 文章编号：1000-3924(2015)01-017-06 米 曲霉谷氨酰胺合成酶基 因(AoglnAI)在大肠杆菌中的 表达和酶学特性研究 杨 君 ，王 航 ，薛 微 ，赵 伟 ，田永生。，彭 日荷 ¨，姚泉洪。 (南京农业大学园艺学院，南京210095；上海海洋大学水产与生命学院，上海201306； 上海市农业科学院生物技术研究所 ，上海201106) 摘 要：将人工合成的米曲霉谷氨酰胺合成酶基因(AoglnAI)在大肠杆菌中表达，通过谷氨酰胺营养缺陷型 菌株功能基因互补进行了试验，并利用亲和层析法对重组酶进行纯化。结果表明：重组酶分子质量为40．1kD， 酶的最适反应温度为30℃，最适 pH为7．0。重组酶对底物谷氨酸钠 、氨、ATP的 值分别为 9．10mmol／L、 2．05mmol／L、2．49mmol／L。重组酶的酶学特性与非重组酶有一定的差异。 关键词：谷氨酰胺；蛋白表达；蛋白纯化；酶活性 Expression andcharacteristicsofrecombinantAspergillusoryzae glutamineinEscherichiacoli YANGJun，WANGHang，XUEWei，ZHAOWei，TIANYong-sheng，PENGRi-he ，YAOQuan-hong (CollegeofHorticulture，NanjingAgriculturalUniversity，Nanfing201195，China；CollegeofFisheriesandLfie Science，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai201306，China；BiotechnologyResearchInstituteofShanghai AcademyofAgriculturalSciences，Shanghai201106，China) Abstract：Thesyntheticglutaminesynthetasegene(AoglnAI)ofAspergillusoryzaewasexpressedinEsche— richiacoli，anditwasverifiedbyfunctionalgenec0mplementationofgkitamineauxotrophicstrain．Therecombi— nantenzymewaspurifiedbyaffinitychromatography．Theresultsshowedthatthemolecularmassofrecombinant enzymewas40．1kD．Theenzyme’Soptimalreactiontemperaturewas30 ℃ ，theoptimalpH was7．0．TheK of recombinantenzymetothesubstrateglutamate，ammonia，ATPwere9．10，2．05，2．49mmol／L，respectively．The enzymaticcharacteristicsofrecombinantenzymehadacertaindifferenceswithnonrecombinantenzyme． Keywords：Glutaminesynthetase(GS)；Proteinexpression；Proteinpurification；Enzymeactivity 谷氨酰胺合成酶(GS；EC6．3．1．2)是生物体中最古老也是存在最广泛的酶 J。它在细菌和真核生物 中参与了生物体碳和氮的代谢，在多种氨基酸合成中作为氮源的供体，是生物体必不可少的重要酶类 。 对于生物体的生长和发育而言，氮素的同化是十分重要的生理过程，无机氮必须同化为谷氨酰胺形式的 有机氮才能被生物