头孢西丁纸片扩散法鉴定耐甲氧西林的葡萄球菌.pdfVIP

头孢西丁纸片扩散法鉴定耐甲氧西林的葡萄球菌 路秀文张淑萍王金良 (天津市公安医院300050) 类抗生素(如万古霉素)的广泛使用，但无依据的滥用造成了葡萄球菌对这类抗生素的耐药。准确的检 出和鉴定可使我们正确及时地选择糖肽类抗生素，有效控制感染，并减缓因糖肽类抗生素滥用而导致的 耐药。由于mecA基因是MRs的分子基础，mecA基因检测是实验室检测可靠的方法之一，但因其设备、 试剂和费用等方面的限制，不易在临床中广泛应用，临床常用K—B纸片扩散法。本文采用苯唑西林纸片 扩散法及头孢西丁纸片扩散法检测·晦床分离的17株金黄色葡萄球菌和18株表皮葡萄球茸，并对每株茵的 两种检测方法所得结果进行比较。用mecA基因检测法鉴定结果不一致的菌株，对两种方法的灵敏度和特 异性进行比较，评价了新方法的可靠性与临床实用性。结果显示在所检测的35株葡萄球菌中，头孢西丁 测为阴性。本实验头孢西丁纸片扩散法的灵敏度为100％，特异性为100％，苯唑西林纸片扩散法的灵敏度为 96％，特异性为100％。因此，头孢西丁纸片扩散法鉴定耐甲氧西林的葡萄球菌在临床实验室中值得推荐。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1菌株我院2004年9月自临床分离的墙株金黄色葡萄球菌，17株表皮葡萄球菌，常规培养染 色和凝固酶试验后用VITEK细菌鉴定系统鉴定。 TrrACC 2为5’CTYCCACATACCTIC 3’，TaqE由上海生物工程公司合成；M—H培基购自天津金章科技 发展有限公司。 1．1．3仪器PCR扩增仪(PE公司)；VITEK鉴定仪(法国梅里埃公司) 1．2方法 1．2．1苯唑西林纸片扩散法按照美国临床实验室标准化委员会(NCC．LS)”’标准，菌液制备采用挑 取孵育24小时的单个菌落，以生理盐水校正至O．5麦氏比浊，均匀涂布于M—H培基上，加入苯唑青霉 12 Im为中介，≥13nma为敏感，表皮葡萄球菌抑菌环直径≤17rrma为耐药，≥18mm为敏感。 1．2．2根据NCCLS 1．2．3 luI为模板加入PCR反应体系中。PCR反应体系中含缓冲液5ul×10，呦E 分钟，72。c延伸1分钟，进行加次循环，每次循环退火温度降低1℃，第21个循环中，72℃延伸7分钟。 将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色，紫外灯下肉眼可见到扩增特异区段DNA带，与标准MRS的电泳 图谱相比较。对35株葡萄球菌进行鉴定。 2结果 2．1 mecA基因检测和表型检测结果 97．1％，见表1。 表1筛选MRS不同方法检测结果 2．2头孢西丁纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌环直径 圜 一 一L．仁唯 抑菌环直径单位Rim 图1头孢西丁纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分布 6 i 3 2 _ 圜 l ___ __● 0 6 lO 15 20 25 30 抑菌环直径单位mill 图2头孢西丁纸片扩散法检测表皮葡萄球菌的抑菌环直径分布 3讨论 但是meeA的表达受遗传和诱导剂等因素影响，因此获得性mecA的耐药水平从表型敏感到高度耐药不等”1， 给表型检测带来困难。基因检测被认为是检测MRS的金标准，但这种方法在临床实验室难以常规开展，纸片 扩散法仍是目前MRS的筛选方法。为了解决表型检测的不足，微生物学家一直在寻求更好的检测MRS方法， 唑青霉素耐药，表皮葡萄球菌抑菌环一24mm为苯唑青霉素耐药，根据这一标准，我们对35