新型双标记筛选痘苗病毒载体的构建及其应用.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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新型双标记筛选痘苗病毒载体的构建及其应用.pdf

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新型双标记筛选痘苗病毒载体的构建及应用李昌杜寿文刘存霞李沂王茂鹏金宁一军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 目的：构建具有三个外源基因表达盒且可进行双标记筛选的新型通用重组痘苗病毒载体，为疫苗构建及痘苗病毒感染与致病机制研究提供有效工具。方法：根据重组痘苗病毒载体所需元件，设计合成具有三个表达框的痘苗病毒穿梭载体表达盒，构建到骨架载体上，分别以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、红色荧光蛋白(RFP)和蓝色荧光蛋白(BFP)作为报告基因，对三个表达盒的功能进行验证。通过噬斑筛选法获得重组病毒，利用PCR、实时荧光定量PCR、Westernblot方法对重组病毒以及对外源基因的表达量和遗传稳定性进行分析。结果：酶切及PCR鉴定表明，载体构建正确。