银芩胶囊抗流感病毒实验的研究.pdfVIP

银芩胶囊抗流感病毒实验研究 黄海1，罗振时1，孙传文2，徐树光3，普俊学3，周佩1 (1，复墨大学药学院，上海200032； 2．上海交通大学生命科学院，上海200030；3昆明制药集团股份公司，云南650032) [摘要]目的：研究银芩胶囊的原料药在体内、外的抗流感病毒活性。方法：采用MTT法检测银芩胶囊 对体外模型MDCK细胞的毒性浓度；采用CPE法测定银芩胶囊体外抑制流感有效浓度；动物模型为昆明种 小鼠，口服给药剂量分别为口服1．0g／kg、0．3g／kg和0．1g／kg，每日两次，共给药六天，通过观察 小鼠生命延长情况及肺病变程度指标判定其抗流感病毒作用。结果：银芩胶囊原料药在1．25mg／mL浓度 下未见对MDCK细胞毒性，在600“g／mL浓度下能有效抑制流感A，病毒，抑制效果与250I．tg／mL利巴韦林 相接近。口服1．0 g／kg、0．3g／kg、0．1g／kg银芩胶囊，能抑制小鼠流感FMl，小鼠生命延长分别为51．1％， 29．1％和2 毒活性。 [关键词]银芩胶囊；流感病毒；抗病毒作用 流感是虽具传染性的传染病之一．具有爆发突然，蔓延迅速，波及面广的特点。据2001年世界卫生 组织公布的数据显示，平均每年有1／10成年人7：11／3的儿童感染一次流感。全球每年流感造成的死亡人 数就不下50万。即使不是流感大流行期．每年囡流感造成的冬季超额死亡人数也是惊人的，同时造成医 疗费用上升，劳动力损失等。中国是流感的高发区，流感的流行和局部爆发基本上每年都有，每年有一 亿多人遭受流感的困扰，到医院就医人数超过50万人。“雅哇黄”是一傣族秘方．其主要处方为金银花、 黄芩、三七叶、鱼腥草等，用于治疗外感风热所致的发热、咳嗽、咽痈、上n于吸道感染、扁桃体感染和咽 炎。二十世纪九十年代末昆明制药集团将其开发成“银芩胶囊”，为了进一步确认其治疗流感的机理及初 步探索其抗病毒的机理，本研究开展了银芩胶囊原料药的抗流感病毒体外及体内试验。 1材料 1．1 银芩胶囊原料药由昆明制药集团股份有限公司提供。 体外试验时将银芩胶囊原料药先用DMSO溶解为20mg／mL的溶液，临用前再用细胞维持液稀释至 各T作浓度。体内试验时将银芩胶囊原料药用o．7％CMC水溶液配置成混悬液使用。 前再用细胞维持液稀释至各工作浓度。体内试验时将利巴韦林原料药用O．7％CMC水溶液配置成混悬液 使用。 双黄连粉针剂(哈药集团制药二厂生产)：体外试验临用前用细胞维持液稀释至各工作浓度。 双黄连胶囊(哈尔滨中药四厂生产)；体内试验时将双黄连胶囊内含物用o．7％CMC水溶液配置成混 悬液使用。 1．2毒株 流感病毒(A扔真利t／30／95)，由上海市卫生防疫站提供，经本室传代保存。 室传代保存。 1，3动物 昆明小鼠，体重17—219，雌雄分别分组。上海市医学实验动物管委会提供。 1．4细胞模型 狗肾细胞、MDCK细胞，由北京中国医学科学院医药生物技术研究所提供，经本窒传代保存。 2方法 2．1 银芩胶囊体外抗流感病毒实验 加入不同浓度(O．08～lo．00 毒性及用MTT法在590nm测定OD值，确定药物对细胞的毒性浓度”J。 2．1．2细胞病变抑制试验MDCK细胞接种r丁I 毒液，加入无毒浓度下不同浓度含药细胞维持液(O．08～1．25 effect，CPE)。实验同时设细胞对照组，阳性药物对照组及病毒对照组， 显微镜下观察细胞病变(cytopathic 与实验组同时观察CPE，根据CPE的程度，采用Reed．Muench法计算，确定药物抑制病变的浓度。 2．2银芩胶羹体内抗流感病毒试验 小鼠称重，雌雄各、p，随机分组，每组10只，实验设正常对照组、病毒对照组、附性药物组、给药 组，给药组设l gl，2小时后 g／kg、0．3g／kg、o．1g／kg剂量。每只小鼠经滴鼻感染10LDs0的流感病毒30 开始灌胃给药，每日两次，共给药六天；正常对照组和病毒对照组给予生理盐水，每日两次，共给药六 天。各组小鼠均观察二周，记录死亡数，作统计学处理，计算P值井计算平均生活曰和生命延长率，另