旋毛虫排泄—分泌抗原的制备和分析.pdfVIP

吉林畜牧兽医增刊 试验报告 旋毛虫排泄一分泌抗原的制备与分析 任科研1，苑淑贤1，杨金生1，都业文2，姚新华1 (1．吉林省兽医科学研究所，吉林长春130062；2．梨树水利灌区管理局，吉林四平136500) 【摘要】目的：将猪旋毛虫肌幼虫感染小鼠剖杀、消化收集虫体，用培养液进行体外培养，稍备排泄一 分泌抗原。用ELISA检测其抗原特异性和敏感性。方法：经培养24h、48h、72h排泄一分泌抗原ES!、 ES2、ES3，对38头份猪旋毛虫病阳性猪血清、98头猪旋毛虫阴性血清、26头猪囊虫阳性血清、35头猪蛔 虫阳性血清和21头猪细颈囊尾蚴阳性血清进行ELISA免疫学方法检测并于粗抗腰进行比较。结果：排泄一 h (92．11％)、ES3(84．21％)。结论：感染猪旋毛虫小鼠35d剖杀，1％胃蛋白酶和1％盐酸37℃消化18 虫体活力最能强。用RPMI一1640培养液37℃培养24h制备的排泄一分泌抗原ES，抗原特异性强，敏感 性高。 【关键词】旋毛虫：排泄一分泌抗原；制备与分析 旋毛虫病f 展．在过去的20年内世界上许多地区又出现了本病的爆发．目前全世界大约有1100万人感染者．国 Oil Commission 际旋毛虫病委员会fInternational 猪感染．现已将其列入再次出现的疾病(re—emergingdisease)。当前诊断旋毛虫病最主要方法有压片镜 检法、血清学诊断法和免疫学检测法f11。免疫学诊断方法优于其他方法．但免疫诊断的特异性主要取 决于抗原的质量．按照抗原的来源．可将旋毛虫抗原分为虫体抗原、表面抗原及排泄一分泌抗原 (ES)[2]。由于在旋毛虫感染过程中其Es抗原直接暴露于宿主的免疫系统．是诱导宿主产免疫反映的主 要抗原．也是目前研究最多的旋毛虫抗原．在旋毛虫病的免疫诊断及免疫预防方面具有重要作用f3】。 为此．本试验将旋毛虫的肌幼虫用1640培养液进行24h、48h、72h体外培养．制备旋毛虫排泄一分 泌抗原．用ELISA检测三个时间培养制备的排泄一分泌抗原的特异性和敏感性。 l 方法 1．1 实验动物 雄性BALB／c小鼠，8周龄，体重约20g／只；由省生物制品所动物室提供。 1．2 旋毛虫虫株 采用中国河南省南阳市肉联厂由本实验室用小鼠传代保种。 1．3 常用主要试验材料 养箱、聚乙二醇一10000、超净工作台。 1．4 猪旋毛虫肌肉虫的体外培养 1-4．1人工感染 用河南株猪旋毛虫人工经口感染每只小鼠，感染量为400～500条／只。 1．4．2 虫体的消化 d以上的小白鼠处死 虫体的消化按照朱兴全等【4】的方法．稍加改进后将感染旋毛虫后饲养35—50 ．5． 试验报告 吉林畜牧兽医增刊 之后，剥皮并除去内脏，提取肌肉，剪碎。在恒温箱中用磁力搅拌器搅拌消化．比较不同的消化时间对 消化结果的影响。 1．4．3 虫体的收集 min然后弃去 在超净工作台中将已消化好的肌幼虫消化液用40孔目的铜筛过滤．收集滤液静置30 上清液沉淀物中加入一定量的灭菌生理盐水后静置20rain弃上清反复洗济至上清液透明即可得到纯 净的旋毛虫肌幼虫。收集的虫体一部分用于排泄一分泌抗原的制备，另一部分用于制备虫体粗抗原。 1．5 旋毛虫排泄一分泌抗原的制备 将洗涤好的旋毛虫肌幼虫用培养液洗涤数次。然后用培养液按一定的比例进行稀释．放置于培养瓶 h和72 w