体外培养皮层神经元氧糖剥夺致细胞凋亡模型的建立.pdfVIP

济 宁医学院学报 2015年 2月第 38卷第 1期 19 doi：10．3969／j．issn．1000—9760．2015．01．004 ·基础 医学 · 体外培养皮层神经元氧糖剥夺致细胞凋亡模型的建立 武 菲 白 波 张秋玲 (1济 宁医学 院基础学 院，山东 济宁 272067；。泰 山医学院，山东 泰安 271000) 摘 要 目的 采用简便、有效的方法建立体外培养神经元氧糖剥夺致凋亡的模型。方法 新生大 鼠皮层 神经元培养 7d后，全量换液为不含葡萄糖 的Earle’S液，并 以灭菌液体石蜡封 闭。MAP2荧光染色观察神经元 损伤情况 ，采用 LDH和 Tunel法检测大 鼠皮层神经元大致死亡和凋亡情况 。结果 随着氧糖剥夺 时间的延长， 神经元损伤加重并发生凋亡 ，与对 照组比较有显著差异 。结论 无糖 Earle’S液培养并配合灭菌液体石蜡封闭， 可 以模拟神经元缺血缺氧，导致神经元凋亡。 关键词 氧糖剥夺；凋亡 ；模型 中图分类号 ：R338．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：i000—9760(2015)O2一O19一O4 Inductionofapoptosisbyoxygen。glucosedeprivationofprimarycorticalneuronsinvitro WUFei，BAIBo。ZHANGQiuling (AcademyofBasicMedicine，JiningMedicalUniversity，Jining272067，China) Abstract：Objective ToestablishaneffectiveandconvenientneuronalapoptosismodelinvitroinducedbyOX- ygen—glucosedeprivation．M ethods Thecorticalneuronsofnewbornratswasculturedfor7days．Thewholecell culturemedium wasremovedandthenEarleSsolutionwithglucoseorwithoutglucosewasadded．Theglucose—free EarleSsolutionwassealedwith sterileparaffin liquid．ThedamageofneuronswereobservedbyMAP-2fluorescent staining，whiletheneuronaldeathandapoptosiswereinvestigatedbyLDH releaseandTUNEL staining．Results LDH releaseincreased in a time-dependentmanner，andtheapoptosiscould beinduced by OGD asshowed by TUNEL staining．TherewassignificantdifferencebetweenOGD andcontrolgroup．Conclusion Itisfeasibleto imitatethehypoxiaischemiaofneuronsinvitrowhichinducestheapoptosisviaculturingwithglucose—freeEarles solution and sealingwithsterileparaffin liquid． Keywords：Oxygen-GlucoseDeprivation；Apoptosis；Model 神经元离体培养在神经科学研究中具有重要 1．1 实验动物 价值和独特优点，为多种神经系统疾病的研究提供 出生