鹿茸蛋白提取方法探究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P-G020 鹿茸蛋白提取方法研究· 张丽华8¨，霍玉书b，张玉奎a 曲焱焱a，高亮a梁振a 4中国科学院分离分析化学重点实验室，国家色谱研究分析中心，大连化学物理研究所，大连116023； “得克萨斯大学健康科学中心，圣安东尼奥78229．3900 关键词：蛋白，提取方法，液质联用，鹿茸 1 前言 鹿茸是我国传统的名贵中药材，对神经、心血管、免疫、生殖系统等具有显著的调节作用。研 究表明鹿茸的活性成分可能是其中的蛋白质和多肽类分子。为全面获得鹿茸的蛋白质信息，本文采 用了五种鹿茸蛋白质的提取方法，并利用液质联用分离鉴定了提取蛋白质，以考察五种方法的互补 性。为后续鹿茸蛋白质组学研究奠定了基础。 2实验方法。 HCl、2M ，将冻干马鹿鹿茸片在液氮条件下磨碎。称取等质量的五份，分别加入4倍体积的1．2M NaOH、100mMTris+6M盐酸胍、100mMTris+6M盐酸胍+O．5M +35mMTris+65mM 时。然后用0．45岬滤膜除去不溶物，并测定蛋白浓度。各取5种蛋白质提取液依次进行丙酮沉淀， 并用胰蛋白酶酶解后，利用RPLC．MS对获得到的肽段进行分离鉴定。 色谱条件：色谱柱：XBPC18，150x0．3mm 一380min，80％B；进样量：25p．g：流速：69L／min。 质谱条件：150℃；喷雾电压：2．OkV；扫描范围：m／z400--2000：碰撞能量：35％。 3结果与讨论 26．954mg／mL和29．144mg／mL。这说明后四种蛋白质提取方法更为有效。 五种蛋白质提取液的RPLC．MS分离鉴定结果如图1所示。从质谱鉴定结果来看，5种提取方法 鉴定蛋白质的重合率非常小，这说明5种提取方法具有一定的互补性。为获得较为完整的鹿茸蛋白 质组信息，综合利用上述五种方法对蛋白质进行提取是十分必要的。 4结论 本文考察了五种鹿茸蛋白质的提取方法。结果表明，采用不同溶液提取得到的蛋白质浓度差异 明显：从肽段水平上的分离鉴定结果来看，获得的蛋白质种类也有所区别。这说明几种提取方法具 有一定的互补性。为了更全面的考察鹿茸蛋白的信息，应综合使用几种提取方法对鹿茸进行蛋白质 组学分析。 ’ ‘重大科学研究计划(2007CB914loo)和国家自然科学基金资助 “通讯联系人，张丽华，Emaih tihuazhang@diep．∞．∞ RT：0．00．380．OeSM：7a 1 1 Time‘mj几) 图l五种蛋白质提取液的RPLG．MS分离鉴定图谱