应用抑制消减杂交技术筛选猪前脂肪细胞诱导分化前后差异表达基因.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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应用抑制消减杂交技术筛选猪前脂肪细胞诱导分化前后差异表达基因.pdf

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第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集应用抑制消减杂交技术筛选猪前脂肪细胞诱导分化前后的差异表达基因刘海峰，李学伟，朱蛎，帅素容四川农业大学动物科技学院，雅安625014 关键词：猪；前脂肪细胞；抑制消减杂交；差异表达基因引言具有聚脂的潜力，经诱导后能在胞浆内聚积脂滴而分化为成熟的脂肪细胞。目前，对前脂肪细胞诱导分化过程中相关基因表达规律的研究大多集中在PPARs和C／EBPs两个基因家族上，为进一步拓展筛选与前脂肪细胞 cDNASubtraction Kit构建猪前脂肪细胞诱导分化前、分化相关基因，本研究利用Clontech公司的PCR．SelectTM 后正反向抑制消减cDNA文库，继而筛选前脂肪细胞诱导分化前、后的差异表达基因，为研究动物脂肪沉积、肥胖等提供新的候选研究基因。材料方法 ‘ 选择2日龄长白猪与荣昌猪的二元杂交健康仔猪，利用胶原酶消化法获得原代培养前脂肪细胞，利用 nmol／LIn+100nmol／LDEX+0．25mmol／LIBMX+100nmol／L DMEM／F12完全培养液+50 RSG对前脂肪细胞进 h、24h、36h和48h的细胞抽提总RNA，并将诱导前、后各时间点总行诱导分化，分别对诱导前、后12 RNA进行等量混合以构建猪前脂肪细胞诱导前、后总RNA cDNASubtraction Clontech公司的PCR．SelectTM Vector构建猪前脂肪细胞诱导分化前、后正 Kit和pMDl8．T 反向抑制消减cDNA文库，经斑点杂交进一步筛选阳性克隆，对阳性克隆进行测序、载体及接头序列的去除，结果无参考mRNA序列。在SSH一1文库所分离出的130个已知基因中，参与脂类和脂肪酸转运的基因有7个∞儿，多种生物学进程。．讨论与结论本研究所筛选的基因中，只有较少部分有报道与脂类相关，更多的还未见报道，其中有大部分基因目前的文献很少，其功能究竟如何有待进一步研究。本研究所得基因有大部分在猪上还未有参考’mRNA序列，我们正在利用所获EST通过电子克隆获取其mRNA全序列，并对部分基因通过real．timePCR作进一步验证。致谢 1 本研究受国家科技支撑计划项目(2007BAD5 一186—