由Cx32组成细胞缝隙连接对顺铂细胞毒性影响.pdfVIP

基因ABCG2的表达、多态性的分布及其对病人预后的影响。 结合的实验方法分析ABCG2基因的多态性，同时予以基因测序验证；应用定量RT-PCR分析 ABCG2基因的表达。 结果：在ABCG2 A(G34A)是独立的急性白血病病人预后的影响因素，ABCG234AA／GA基因型病 34GG基因型病人的短。 人的无复发生存期和总生存期明显比ABCG2 结论：ABCG2G34A多态性可能通过改变ABCG2的功能减弱细胞对化疗药物的的外排而增加 药物对正常组织的毒性作用从而影响病人的预后。 【关键词】急性白血病，ABCG2，单核苷酸多态性，多药耐药 电话：020 作者地址：中山大学肿瘤防治中心604，广州东风东路651号 电子邮箱：wangfan902030163．com 由Cx32组成的细胞缝隙连接对顺铂细胞毒性的影响 左亮 (中山大学中山医学院，广州510080) 目的： 本研究拟建立“研究GJ功能与化疗药物细胞毒性的关系”的实验模型。本研究在转染并稳 定表达Cx32的HeLa细胞，用药物和分子生物学方法改变GJ功能，探讨GJ功能与顺铂细胞 毒性的关系，并通过分析三种不同化学结构的镇痛药(吗啡、曲马多和氟比洛芬酯)对顺铂 细胞毒性的影响与其对GJ功能的影响之间的关系，验证此模型的有效性。 方法： 1- (standard 在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞，用“标准细胞集落形成分析法” colony-formingassay)测定顺铂对Hela细胞生长的抑制作用(细胞毒性)。 2． 采用不同密度接种细胞，获得生长融合和生长未融合细胞。高密度接种获得生长融合细 胞(细胞之间紧密接触，有条件形成GJ)：低密度接种获得生长未融合细胞(细胞之间无接 触，即使有Cx表达，也无条件形成GJ)。用“标准细胞集落形成分析法”观察GJ形成对顺 铂细胞毒性的影响。 3． 选用BD 进行转染。这种pBI质粒Cx的表达是可以控制的，一般情况下，cx不表达；需要表达时， 的细胞伤害。用Western assay)测定GJ荧光传递功能，“标准细胞集落形成分析法”观察Cx32表达及GJ形成对顺铂 细胞毒性的影响。 4． 在有Cx32表达并形成GJ的细胞，用“细胞接种荧光示踪法”测定GJ抑制剂18-a acid(18-a-CA)和增强剂retinoidacid(RA)对GJ荧光传递功能的 —91ycyrrhetinic 影响，“标准细胞集落形成分析法”观察18一a-GA和RA改变GJ功能对顺铂细胞毒性的影 8l 响。 5． “细胞接种荧光示踪法”测定三种镇痛药(吗啡、曲马多和氟比洛芬酯)对GJ荧光传 递功能的影响，用“标准集落形成分析法”测定三种镇痛药对顺铂细胞毒性的影响。 结果： 1． 在转染Cx32的Hela细胞，集落形成实验结果显示：在生长融合和生长未融合的细胞(均 表达Cx32)，顺铂作用细胞l小时能够浓度依赖性地抑制细胞集落形成率。在生长融合细胞 (细胞之间形成紧密接触，有条件形成GJ)，顺铂对细胞集落形成率的抑制作用明显高于生 长未融合细胞(细胞之间未形成接触，即使表达Cx，也无条件形成GJ)。结果表明，细胞的 融合程度能够显著影响顺铂的细胞毒性。为了探讨细胞生长融合程度对顺铂细胞毒性的影响 是否通过GJ而产生，我们接下来用控制Cx表达和改变GJ功能的方法，研究GJ功能对顺铂 细胞毒性的影响。 2． Western blot结果显示：lttg／ml 胞接种荧光示踪结果显示：ittg／mldoxycycline诱导后GJ的荧光传递功能明显增强。细胞 情况下，Cx32表达与否(doxycycline诱导或者不诱导)对顺铂细胞毒性没有显著影响。结 果证明，在生长融合的细胞，GJ形成可增加顺铂的细胞毒性；而Cx32及其组成的半通道在 未形成GJ前不影响顺铂细胞毒性。 3． 光传递明显降低，这证明18-o_GA可以显著降低由Cx32组成的GJ功能。细胞集落形成实 验