天麻素对缺血性脑组织损伤保护机制研究.pdfVIP

致有催化活性的铁释出，导致脂质过氧化。而且，Hb导致的细胞死亡是剂量依赖性的。 脑溢安颗粒剂是适用于脑出血急性期的中药三类新药，己进入二期临床实验阶段。该方由钩藤，大黄，丹 皮等组成，以平肝熄风，凉血泻火，行血化痰为治法。临床观察发现本方可明显促进血肿吸收，提高患者生活 质量；动物实验还表明可上调实验性脑出血大鼠脑内Bcl·2的表达，减少NO生成，改善神经元有氧代谢，减 少海马细胞缺失；体外实验提示它还能保护Hb损伤的神经元，提高其存活数量，延长存活时间。 产物胆绿素、胆红素抗脂质过氧化，及一氧化碳与可溶性鸟苷酸环化酶的heine结合，使之活化，使从GTP 向cGMP转化的Vmax增加，从而改变血管状态及应激状态下参与细胞防御机制等一系列生物效应有关。 著增高，一方面对抗增强的脂质过氧化，其水平增高可作为氧化应激的的标志；另一方面清除因血脑屏障开 的血管痉挛、保护神经元，并有可能与新血管的发生有关，因而它被看作一个新的用药的靶点。本研究结果显 似．这应是机体对抗损伤的一个保护性反应，但结合有关报道，该反应似乎不足以阻断对神经元等脑实质细 胞的损伤。 在较短的时间内清除因出血而进入脑实质的Hb和超急性期死亡细胞释放的含heine蛋白，减少了它们对脑 的损害，这点在以往脑溢安与神经元缺失的相关研究中可得到支持，这也为该方行血化瘀的治则提供了新的 依据。而此方在HB等强诱导剂的作用基础上，还可进一步增加HO一1表达，可能与它可改善细胞的有氧代 谢，从而为HO一】等应激蛋白的紧急合成提供能量有关。 天麻素对缺血性脑组织损伤的保护机制研究 龙洁 张在强 李小玲刘永珍首都医科大学附属北京天坛医院神经科北京100050 ，、 币壤参。j： 、脑缺血所激发的一系列级联反应和多重病理机制介导了缺血半暗带从潜在可逆性缺血逐渐向不可逆性 损伤进展。在缺血损伤过程中同时存在损伤与修复二种机制，兴奋性氨基酸介导的钙积聚、大量自由基形成、 修复通路中的一种多功能蛋白酶，主要参与对氧化性损伤造成的DNA损害的修复。研究发现脑缺血区 素。中药天麻具有“熄风止痉，祛风通络作用”。主治急慢惊风、抽搐拘挛、破伤风、眩晕、头痛、半身不遂、肢麻、 风湿痹痛。”现代药理学研究表明：天麻素和天麻甙元是天麻的主要有效成分，具有镇静安神、扩张脑血管、降 血压、促进受损脑组织恢复、抗炎等作用。本研究旨在通过局灶性脑缺血模型，观察天麻索对脑缺血面积、 Ref—l蛋白表达水平的影响，探讨关麻素对缺血脑损伤的保护作用。f 7 1材料与方法 1．I实验动物Wistar雄性大鼠90只，体重250～300克，由中国医科院动物研究所提供。 12动物分组对所有大鼠进行编号，按随机数字表将大鼠随机分为A、B、c三组。A组12只用于脑梗死 面积的比较，分为缺血来干预组和天麻素干预组(各6只)；B组48只用于免疫组化观察，分为正常对照组、 将大鼠分为正常对照组、缺血1h、6h、24h组及天麻素干预组(每组6只)。 5l 塞右侧大脑中动脉。假手术组栓线进入1．5era，术后24小时取材。模型成功的标志为：手术麻醉清醒后，大鼠 左侧偏瘫．左下肢伸直，站立不稳，向一侧转圈。 天麻紊由昆明制药集团有限公司提供，按100mg／kg于脑缺血后15分钟内腹腔内注射。6h后重复注射 一次。 1．4脑组织取材和处理方法A组均于脑缺血后24h断头取脑。TTC染色，统一观察尾壳核平面，采用求 积仪计算梗死面积；B组中假手术组与天麻素干预组在术后24h，缺血组于各自相应时间点使用4％多聚甲 醛磷酸缓冲液心脏灌注固定，取材脑组织后固定12h，冰冻切片，片厚20pm，连续切片用于免疫组化；C组天 麻素组在缺血后24h、缺血各组分别于相应时间点断头取脑，以尾壳核平面为中心取2～3ram厚的脑组织， 净重约30mg，切碎匀浆。 1．5 APE／Ref一1免疫组化染色采用免疫组化SP法染色：一抗APE／Ref—l抗体(SantaCruz公司，兔抗 鼠多抗)稀释度1：100，二抗生物素标记的工作液(北京中山生物技术公司)，三抗辣根过氧化物酶标记的链 霉卵白素工作液(北京中山生物技术公司)，二氨基联苯胺显色系统显色，苏木素复染。 1．6应用Olympus光学显微镜观察APE／Ref一1免疫组化染色，采用网