鸭Ⅰ型肝炎病毒探究进展.pdfVIP

鸭肝炎 离出了一株DHV．I病毒，我们将该DHV．I病毒命表明，扩增出约一条约250bp条带，与预期结果相符 名为ZJ-V／2006毒株。 合；而测序结果表明，该毒株序列与国内第一个破译 1材料与方法 的DHV．IC80毒株相应区域核苷酸序列同源性为 浙江某地区某养殖户送检雏鸭病料，经鸡胚分 97．1％。 离与鉴定，确定为DHV．I；将病料碾磨液过滤除菌 3讨论 后接种BHK．21细胞，同时设置未接毒的对照瓶，72 本研究基于对部分小RNA病毒科病毒可适应 h后收毒，然后盲传3．5代；将致BHK．21细胞病变于BHK．21细胞增殖的情况，尝试了将病料上清接 的细胞培养物冻融裂解上清经浓缩、负染后进行电 种BHK．21细胞，接种首次无明显细胞病变，盲传3 代后。接毒36h细胞出现病变，当培养至72h细胞 镜观察；用兔抗DHV．I血清进行IFA检测分离病 毒；以DHV．I的一对特异性引物对分离的病毒进行时，CPE达到80％以上；另又通过病毒粒子的形态 RT．PCR扩增与鉴定；将扩增产物送生物公司测序，观察，IFA，RT-PCR鉴定和序列分析等方法，最终确 然后与已知的DHV．I序列进行比对。 定DHV．1型病毒在BHK．21细胞中增殖获得成功。 2结果与分析 BHK．2I细胞分离DHV．I的成功为今后分离鉴定 DHV—I以及开展该病毒的分子致病机理、基因组结 接种肝组织病料上清后的BHK．21盲传至第3 代后开始出现CPE，传至第6代后CPE趋于稳定，病构与功能等应用基础研究建立了一个良好的细胞模 变细胞表现为变圆，皱缩，并逐渐脱落，命名为刁． 型。 V／2006株。浓缩样品经负染后电镜观察可见直径 参考文献 大小约30nm，无囊膜的球形病毒粒子，该形态结构 ofduck [1】LevinePP，FabtiesatJ，Ahithertmundetscitibedvirusdisease 与FMDV相似。兔抗DHV．I阳性血清与接种分离 inNorthAmcrica[J】．CornellVet．1950．40(I)：71一艏． 毒的BHK．21病变细胞反应，胞浆内发出的特异性 [2】黄新民．陈琨．应用鸭胚肝细胞培养鸭肝炎病毒的研究[J]． 强荧光，而正常对照细胞无特异性免疫荧光，结果表 中国膏禽传染病。1994。1：3—5。 明所分离的病毒可能为DHV．I；RT-PCR电泳结果 鸭I型肝炎病毒研究进展 倪征。云涛’。余斌，陈柳，华炯钢。李双茂 (浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所．浙江杭手H310021) committeeOn of Vires 员(international viru眈s， 鸭I型肝炎病毒(Duck I， taxonomy Hepatitistype DHV．I)是引发雏鸭的一种高度致死性病毒性传染IcTv)第